人生病需要进行药物治疗，动物生病也是如此。动物用药-兽药类型包括：一般疾病防治药，传染病防治药，体内、体外寄生虫病防治药，其他药。
氟苯尼考属于酰胺醇类抗生素，为《中国兽药典（2020年版）》一部中收录的品种，用于巴氏杆菌和大肠埃希菌感染。
本文使用K2025高效液相色谱仪测定氟苯尼考粉中氟苯尼考的含量。
色谱条件
色谱条件
K2025高效液相色谱仪：K2025 P2二元高压输液泵、K2025 AS自动进样器、K2025 CO柱温箱、K2025 UVD紫外-可见光检测器、Wookinglab色谱工作站；
色谱柱：C18色谱柱，4.6×250 mm，5 μm或者相当的色谱柱；
流动相：乙腈-水-冰醋酸=100:197:3；
流速：1.0 mL/min；
柱温：25℃；
检测器及检测波长：紫外-可见光检测器，检测波长设置为224 nm；
进样量：10 μL。
实验结果
重复性测试
按照色谱条件进行采集，系统适用性溶液的色谱图如图1所示，积分结果如表1所示。
图1 系统适用性溶液的色谱图
表1 系统适用性溶液色谱图积分结果
|
目标物 |
甲砜霉素 |
氟苯尼考 |
|
保留时间(min) |
3.708 |
6.917 |
|
峰面积(mAU.s) |
585.342 |
802.998 |
|
峰高(mAU) |
119.031 |
98.038 |
|
理论塔板数 |
13712 |
16754 |
|
分离度 |
- |
18.85 |
|
对称/拖尾因子 |
1.25 |
1.10 |
由表1中数据可知，甲砜霉素峰与氟苯尼考峰的分离度为18.85，满足《中国兽药典（2020年版）》中规定的甲砜霉素峰与氟苯尼考峰的分离度应大于4.0的要求；氟苯尼考峰的理论塔板数为16754，满足《中国兽药典（2020年版）》中规定的理论塔板数按氟苯尼考峰计算应不低于2500的要求。
将氟苯尼考标准溶液（浓度为44.278 μg/mL）连续进样7针，叠加的色谱图如图2所示，结果见表2。
图2 氟苯尼考标准溶液连续进样7针叠加的色谱图
表2 氟苯尼考标准溶液进样7针重复性数据统计
|
目标物 |
氟苯尼考 |
|
|
|
保留时间 （min） |
峰面积 （mAU.s） |
|
1 |
6.908 |
710.714 |
|
2 |
6.908 |
709.795 |
|
3 |
6.908 |
711.766 |
|
4 |
6.908 |
710.242 |
|
5 |
6.908 |
711.667 |
|
6 |
6.908 |
709.633 |
|
7 |
6.908 |
710.891 |
|
平均值 |
6.908 |
710.673 |
|
RSD% |
0.000 |
0.119 |
连续进样7针进行重复性测试，氟苯尼考保留时间的RSD为0.000%，峰面积的RSD为0.119%，具有良好的定性定量重复性。
含量测定
校准曲线
按照色谱条件，将氟苯尼考系列标准工作液上机测定。氟苯尼考在测定浓度范围内呈现良好的线性关系，确定系数R2为0.9999。
氟苯尼考系列标准工作液叠加的色谱图如图3所示。
图3 氟苯尼考系列标准工作液叠加的色谱图
含量测定
以氟苯尼考粉作为试样，按流程对其进行处理，并进行加标回收实验。计算氟苯尼考粉中氟苯尼考的含量。
氟苯尼考粉试样的色谱图如图4所示。
图4 氟苯尼考粉的色谱图
经计算，氟苯尼考粉中氟苯尼考的含量为22.9%，加标回收率为96.4%。
结论
通过对氟苯尼考的理论塔板数、分离度、重复性、灵敏度、线性的测试以及对氟苯尼考粉中氟苯尼考的含量进行测定，实验结果：
1
氟苯尼考峰的理论塔板数为16754，满足《中国兽药典（2020年版）》中规定的理论塔板数按氟苯尼考峰计算应不低于2500的要求；
2
甲砜霉素峰与氟苯尼考峰的分离度为18.85，满足《中国兽药典（2020年版）》中规定的甲砜霉素峰与氟苯尼考峰的分离度应大于4.0的要求；
3
重复性测试中，将氟苯尼考标准溶液连续进样7针，保留时间的RSD为0.000%，峰面积的RSD为0.119%，具有良好的定性定量重复性；
4
氟苯尼考在测定浓度范围内具有良好的线性关系，确定系数R2为0.9999；
5
对氟苯尼考粉进行含量测定，其氟苯尼考的含量为22.9%，加标回收率为96.4%。
因此，Wooking K2025高效液相色谱仪满足《中国兽药典（2020年版）》中氟苯尼考粉中氟苯尼考含量测定的需求。
