前言
氯霉素是一种酰胺醇类抗生素，其通过抑制细菌蛋白质的合成起到抑制细菌生长的作用；主要用于伤寒、副伤寒和沙门菌属感染。
氯霉素固然有较好的抗菌作用，但它对人体存在毒副作用，近年来在畜禽产品和畜禽体内发现氯霉素的残留量很大。准确、灵敏的测定方法对于安全用药十分重要。
本文使用K2025高效液相色谱仪测定市售氯霉素片中氯霉素的含量。
一
色谱条件
K2025高效液相色谱仪：K2025 P2二元高压输液泵、K2025 AS自动进样器、K2025 CO柱温箱、K2025 UVD紫外-可见光检测器、Wookinglab色谱工作站；
色谱柱：C18 ，4.6×250 mm，5 μm或者相当的色谱柱；
流动相：0.01 mol/L庚烷磺酸钠缓冲溶液：甲醇=68：32；
柱温：30 ℃；
进样量：10 μL；
流速：1.0 mL/min；
检测器及波长：紫外-可见光检测器，277 nm。
二
实验结果
按照色谱条件进行采集，氯霉素标准溶液（浓度为100 μg/mL）的色谱图如图1所示，积分结果如表1所示。
图1 氯霉素标准溶液（浓度为100 μg/mL）的色谱图
表1 氯霉素标准溶液（浓度为100 μg/mL）色谱图积分结果
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目标物 |
氯霉素 |
|
保留时间（min） |
3.433 |
|
峰面积（mAU.s） |
1774.217 |
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峰高(mAU) |
317.155 |
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理论塔板数 |
9013 |
|
对称/拖尾因子 |
1.24 |
由表1中数据可知，氯霉素的理论塔板数为9013，拖尾因子为1.24，具有良好的峰形。
将氯霉素标准溶液（浓度为100 μg/mL）连续进样6针，6针叠加的色谱图如图2所示，结果见表2。
图2 氯霉素标准溶液（浓度为100 μg/mL）连续进样6针叠加的色谱图
表2 氯霉素标准溶液（浓度为100 μg/mL）进样6针重复性数据统计
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目标物 |
氯霉素 |
|
|
标准品 |
保留时间 （min） |
峰面积 （mAU.s） |
|
1 |
3.433 |
1773.011 |
|
2 |
3.442 |
1770.512 |
|
3 |
3.442 |
1770.556 |
|
4 |
3.442 |
1766.962 |
|
5 |
3.433 |
1761.370 |
|
6 |
3.433 |
1760.024 |
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平均值 |
3.438 |
1767.073 |
|
RSD% |
0.143 |
0.301 |
由表2中数据可知，氯霉素标准溶液（浓度为100 μg/mL）连续进样6针重复性测试，保留时间的RSD为0.143%，峰面积的RSD为0.301%，具有良好的定性定量重复性。
校准曲线
按照色谱条件进行采集，将氯霉素系列标准工作液上机测定，氯霉素在测定浓度范围内呈现良好的线性关系，确定系数R2在0.999以上。氯霉素系列标准工作液叠加的色谱图如图3所示。
图3 氯霉素系列标准工作液叠加色谱图
含量测定
氯霉素片样品供试品溶液的色谱图如图4所示。
图4 氯霉素片样品供试品溶液的色谱图
经计算，氯霉素片样品中氯霉素的含量，该样品中氯霉素的含量为79.3%。
三
实验结论
实验结果表明：
氯霉素的理论塔板数为9013，拖尾因子为1.24，具有良好的峰形。
氯霉素标准溶液连续进样6针，保留时间的RSD为0.143%，峰面积的RSD为0.301%，具有良好的定性定量重复性；
氯霉素在测定浓度范围内具有良好的线性关系，确定系数R2为0.9998；
对样品进行测定，市售氯霉素片中氯霉素的含量为79.3%。
因此，Wooking K2025可以满足市售氯霉素片中氯霉素含量测定的需求。
