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金银花配方颗粒的特征图谱 高效液相色谱法

金银花配方颗粒的特征图谱 高效液相色谱法 悟空仪器
2023-09-01
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前 言

随着人们健康意识增强,传统中药的调理保健越来越受到人们重视。中药家族庞大,除了汤剂,还衍生出颗粒剂等剂型。


中药配方颗粒是以传统中药饮片为原料,经过提取、分离、浓缩、干燥、制粒、包装等生产工艺,加工制成的一种统一规格、统一剂量、统一质量标准的新型配方用药。其有明确标准。


以金银花配方颗粒为例。金银花配方颗粒为忍冬科植物忍冬的干燥花蕾或带初开的花经炮制并按标准汤剂的主要质量指标加工制成的配方颗粒,具有清热解毒之功效,主治外感风热或温病发热,中暑,热毒血痢,痈肿疔疮,喉痹及多种感染性疾病。


使用悟空K2025高效液相色谱仪,可测定金银花配方颗粒的特征图谱。



实验方案



原理


金银花配方颗粒试样经50%甲醇溶液超声提取后,采用梯度洗脱,用紫外检测器检测。金银花配方颗粒应呈现8个特征峰。


色谱条件


K2025高效液相色谱仪:K2025 P2二元高压输液泵、K2025 AS自动进样器、K2025 CO柱温箱、K2025 UVD紫外-可见光检测器、Wookinglab色谱工作站;

色谱柱:C18 4.6×250 mm,5 μm或者相当的色谱柱;

以乙腈为流动相A,以0.4%磷酸溶液为流动相B,按下表进行梯度洗脱:


时间(min)

流动相A(%)

流动相B(%)

0

10

90

15

10

90

20

15

85

50

20

80

55

30

70

60

10

90


柱温:35℃;

进样量:10 μL(参照物溶液)/15 μL(供试品溶液);

流速:1.0 mL/min;

波长:350 nm。




实验结果



依据色谱条件,精密吸取参照物溶液10 μL,供试品溶液15 μL,注入液相色谱仪,测定,即得。参照物溶液的色谱图如图1所示,色谱图积分结果见表1。

图1 参照物溶液的色谱图


表1 参照物溶液色谱图积分结果


目标物

2(S):绿原酸

芦丁

木犀草苷

保留时间(min)

11.325

31.700

34.925

峰面积(mAU.s)

634.276

597.314

986.018

峰高(mAU)

42.038

40.897

59.293

理论塔板数

12917

107243

101563

分离度

-

51.87

7.82

对称/拖尾因子

1.08

1.05

1.05


由表1中数据可知,木犀草苷的理论塔板数为101563,满足《金银花配方颗粒》中规定的不低于2000的要求。


供试品溶液的色谱图如图2所示,色谱图积分结果见表2,特征峰相对保留时间结果见表3。

图2供试品溶液的色谱图(峰2(S):绿原酸;峰4:芦丁;峰5:木犀草苷。)



表2 供试品溶液色谱图积分结果表



目标物

保留时间(min)

峰面积

(mAU.s)

峰高

(mAU)

理论塔板数

分离度

对称/拖尾因子

1

6.617

887.351

85.266

9617

-

0.94

2(S):

绿原酸

11.275

8172.334

528.246

12276

13.77

1.11

3

13.200

1338.309

75.716

12514

4.38

1.05

4:芦丁

31.717

171.230

12.288

114950

43.78

0.96

5:

木犀草苷

34.925

197.185

12.485

107862

8.03

1.03

6

40.550

980.285

53.215

108325

12.26

1.04

7

42.400

1975.180

98.515

101646

3.61

1.05

8

49.392

2367.086

111.697

123817

12.79

1.06




表3特征峰相对保留时间结果表



目标物

保留时间

(min)

相对保留时间

测定值

相对保留时间

规定值

偏差

(%)

1

6.617

0.59

0.58

1.72

2(S):绿原酸

11.275

1.00

-

-

3

13.200

1.17

1.15

1.74

4:芦丁

31.717

2.81

-

-

5:木犀草苷

34.925

3.10

-

-

6

40.550

3.60

3.80

-5.26

7

42.400

3.76

4.02

-6.47

8

49.392

4.38

4.64

-5.60



由表2和表3中数据可知,金银花配方颗粒供试品溶液的特征峰个数为8个,与《金银花配方颗粒》中规定的特征峰个数一致;峰1、峰3、峰6、峰7、峰8与S峰的相对保留时间分别为0.59、1.17、3.60、3.76和4.38,均在规定值的±10%范围之内。




结论



本文使用Wooking K2025 高效液相色谱仪测定金银花配方颗粒的特征图谱。


实验结果表明:木犀草苷的理论塔板数为101563,满足《金银花配方颗粒》中规定的不低于2000的要求;供试品溶液的特征峰个数与《金银花配方颗粒》中规定的特征峰个数一致,且相对保留时间均在规定值的±10%范围之内。


因此,Wooking K2025高效液相色谱仪可用于金银花配方颗粒特征图谱的表征。



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