前言
大豆是我们十分熟悉的食物，豆制品是人们餐桌上的常见食品。其富含蛋白质、脂肪和碳水化合物、大豆卵磷脂等，在健脾宽中、润燥消水、清热解毒、益气等方面具有非常好的功效。本次实验，我们一起来了解一下大豆卵磷脂以及它的检测~
大豆卵磷脂是一种生命基础物质，不仅是构成人体生物膜的重要组成部分，而且是胆碱和脂肪酸的来源，对维持生物膜的生理活性和机体的正常代谢起关键作用，被誉为“血管清道夫”。经常补充卵磷脂对预防和改善心脑血管疾病、健脑益智、防止脂肪肝和肝硬化、美化肌肤等有重要作用。鸡蛋、海鲜、大豆及其制品、核桃、芝麻、葵花籽、动物肝脏和脑髓等都含卵磷脂。
本文使用悟空K2025高效液相色谱仪测定大豆卵磷脂类食品中磷脂酰胆碱（PC）、磷脂酰乙醇胺（PE）和磷脂酰肌醇（PI）三种物质的含量。
实验方案
实验原理
磷脂酰胆碱（PC）、磷脂酰乙醇胺（PE）和磷脂酰肌醇（PI）经提取后，在208nm处有紫外吸收，采用高效液相色谱法测定，使用外标法计算含量。
本实验在国家标准《GB 5009.272-2016 食品中磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰肌醇的测定》的基础上，对实验方法适当调整，完成对于三种物质的同时检测。
色谱条件
悟空K2025高效液相色谱仪：
K2025 P2二元高压输液泵、K2025 AS自动进样器、K2025 CO柱温箱、K2025 UVD紫外-可见光检测器、Wookinglab色谱工作站；
色谱柱：硅胶柱，4.6×250mm，5μm或者相当的色谱柱；
流动相：正己烷-异丙醇-乙酸水溶液=（800:800:92）；
流速：1.2mL/min；
进样量：10μL；
柱温：20℃；
检测器及波长：紫外-可见光检测器，检测波长为208nm。
实验过程
重复性测试
按照色谱条件进行采集，混合标准溶液的色谱图如图1所示，积分结果如表1所示。
图1 混合标准溶液（线性3）的色谱图
表1混合标准溶液（线性3）的色谱图积分结果
将混合标准溶液（线性3）连续进样7针，叠加的色谱图如图2所示，结果见表2。
图2混合标准溶液（线性3）叠加的色谱图
表2 混合标准溶液（线性3）连续进样7针重复性数据统计
将混合标准溶液连续进样7针进行重复性测试，磷脂酰乙醇胺保留时间的RSD为0.075%，峰面积的RSD为1.044%；磷脂酰肌醇保留时间的RSD为0.498%，峰面积的RSD为1.682%；磷脂酰胆碱保留时间的RSD为0.121%，峰面积的RSD为1.608%，均具有良好的定性定量重复性。
校准曲线
按照色谱条件进行采集，磷脂酸乙醇胺（PC），磷脂酸肌醇（PE）和磷脂酸胆碱（PI）在测定浓度范围内均呈现良好的线性关系，确定系数R2在0.999以上，标准系列工作液叠加的色谱图如图3所示。
图3 标准系列工作液叠加色谱图
含量测定
对市售大豆卵磷脂样品进行处理，计算大豆卵磷脂样品中磷脂酰乙醇胺，磷脂酰肌醇和磷脂酰胆碱的含量。结果如表3所示。
两次平行测试中，磷脂酰乙醇胺的含量分别为394.3mg/g和387.0mg/g，磷脂酰肌醇的含量分别为103.5mg/g和100.8mg/g，磷脂酰胆碱的含量分别为100.6mg/g和98.4mg/g，两次独立测定结果的绝对差值均未超过算数平均值5%。
表3 样品中磷脂酰乙醇胺、磷脂酰肌醇和磷脂酰胆碱的含量结果表
结论
本文使用悟空K2025高效液相色谱仪测定大豆卵磷脂类食品中磷脂酰胆碱（PC）、磷脂酰乙醇胺（PE）和磷脂酰肌醇（PI）三种物质的含量。
其中，磷脂酰乙醇胺的理论塔板数为1653，拖尾因子为1.53；磷脂酰肌醇的理论塔板数为742，分离度为7.91，拖尾因子为0.88；磷脂酰胆碱的理论塔板数为1165，拖尾因子为7.06，拖尾因子为1.30。
在连续进样7针的重复性测试中，磷脂酰乙醇胺保留时间的RSD为0.075%，峰面积的RSD为1.044%；磷脂酰肌醇保留时间的RSD为0.498%，峰面积的RSD为1.682%，磷脂酰胆碱保留时间的RSD为0.121%，峰面积的RSD为1.608%，均具有良好的定性定量重复性；磷脂酰乙醇胺的仪器检出限为0.008mg/mL，仪器定量限为0.027mg/mL；磷脂酰肌醇的仪器检出限为0.009mg/mL，仪器定量限为0.030mg/mL；磷脂酰胆碱的仪器检出限为0.015mg/mL，仪器定量限为0.052mg/mL。
对市面上购买的大豆卵磷脂进行测定，两次平行测定的结果中，磷脂酰乙醇胺的含量分别为394.3mg/g和387.0mg/g，磷脂酰肌醇的含量分别为103.5mg/g和100.8mg/g，磷脂酰胆碱的含量分别为100.6mg/g和98.4mg/g，两次独立测定结果的绝对差值均未超过算数平均值5%。
因此，Wooking K2025高效液相色谱仪满足对食物中磷脂酰乙醇胺，磷脂酰胆碱和磷脂酰肌醇测定的需求。