前言
根据国家药监局2024年第45号通告，《化妆品安全技术规范（2015年版）》新增3项、修订2项检验方法，自2025年7月1日起正式实施。
规范新增了《化妆品中壬二酸及其盐类的检验方法》《化妆品中非那西丁的检验方法》《化妆品中羟基癸酸的检验方法》3项检验方法；修订了《化妆品中石棉的检验方法》 《化妆品中葡糖醛酸等14种原料的检验方法》2项检验方法，替换原有的检验方法。
针对修订项目，悟空提供相应检测方案。以下为《化妆品中葡糖醛酸等14种原料的含量测定 高效液相色谱法》。
标准解读
1、原料组分变化
新标准将原料组分由原来的10种（化妆品安全技术规范（2022））增加至14种。
2、流动相变更
新标准使用的流动相磷酸氢二铵的浓度为0.05 mol/L，而化妆品安全技术规范（2022）中配制的磷酸氢二铵的浓度为0.1 mol/L。
3、流动相梯度变化
化妆品安全技术规范（2022）中流动相梯度条件如表1所示：
表1 流动相梯度表（2022年）
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(min) |
流速 (mL/min) |
A (%) |
B (%) |
|
0 |
0.7 |
0 |
100 |
|
7.0 |
0.7 |
0 |
100 |
|
7.1 |
1.0 |
0 |
100 |
|
14.0 |
1.0 |
50 |
50 |
|
14.1 |
1.0 |
65 |
35 |
|
23 |
1.0 |
65 |
35 |
|
23.1 |
0.7 |
0 |
100 |
|
28.0 |
0.7 |
0 |
100 |
仪器配置
悟空K2025高效液相色谱仪：K2025 P2二元高压输液泵、K2025 AS自动进样器、K2025 CO柱温箱、K2025 DAD二极管阵列检测器、Wookinglab色谱工作站。
色谱条件
色谱柱：C18 色谱柱（可耐纯水相），4.6×250 mm，5 μm或者相当的色谱柱；
流动相：以甲醇为流动相A，磷酸氢二铵溶液（用磷酸调节pH值为3.0）为流动相B，如表2所示进行梯度洗脱：
表2 梯度系统表
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时间 (min) |
流速 (mL/min) |
A (%) |
B (%) |
|
0 |
0.7 |
0 |
100 |
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6.5 |
0.7 |
0 |
100 |
|
6.6 |
1.0 |
0 |
100 |
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15 |
1.0 |
40 |
60 |
|
30 |
1.0 |
70 |
30 |
|
40 |
1.0 |
70 |
30 |
|
40.1 |
0.7 |
0 |
100 |
|
50 |
0.7 |
0 |
100 |
进样量：5 μL；
洗针液：10 %甲醇水溶液；
柱温：30 ℃；
检测器及检测波长：检测器为二极管阵列检测器，检测波长为214 nm。
重复性测试
待仪器工作状态稳定后，按照色谱条件进行采集，14种原料混合标准溶液（葡糖醛酸浓度为1.975 mg/mL、酒石酸浓度为0.990 mg/mL、羟基乙酸浓度为1.990 mg/mL、苹果酸浓度为1.994 mg/mL、乳酸浓度为2.489 mg/mL、柠檬酸浓度为2.552 mg/mL、2-羟基丁酸浓度为2.507 mg/mL、乳酸甲酯浓度为2.494 mg/mL、扁桃酸浓度为0.050 mg/mL、乳酸乙酯浓度为1.985 mg/mL、乳酸丁酯浓度为2.500 mg/mL、二苯乙醇酸浓度为0.050 mg/mL、柠檬酸三乙酯浓度为2.433 mg/mL、羟基辛酸浓度为2.500 mg/mL）的色谱图如图1所示，积分结果如表3所示。
图1 14种原料混合标准溶液的色谱图
表3 14种原料混合标准溶液的色谱图积分结果
由表3中数据可知，14种原料的理论塔板数范围为4805~181675，分离度均≥1.74，均具有良好的峰形。
将14种原料混合标准溶液连续进样7针进行重复性测试，叠加的色谱图如图2所示，积分结果如表4所示。
图2 14种原料混合标准溶液连续进样7针叠加的色谱图
表4 14种原料混合标准溶液连续进样7针重复性数据统计
由表4中数据可知，14种原料混合标准溶液连续进样7针重复性测试中，保留时间的RSD范围为0.00 %~0.13 %，峰面积的RSD范围为0.13 %~0.49 %，均具有良好的定性定量重复性。
含量测定
按照色谱条件进行采集，将14种原料混合标准系列工作液上机测定，14种原料在测定浓度范围内，曲线的确定系数R2均在0.999以上，线性关系均良好。叠加色谱图见图3。
图3 14种原料混合系列标准工作液叠加色谱图
含量计算
按照步骤对市售维生素E乳进行处理，并计算市售维生素E乳中葡糖醛酸等10种α-羟基酸的含量、乳酸甲酯等3种乳酸酯类物质的含量、柠檬酸三乙酯的含量。试样测定液的色谱图如图4所示。
图4 试样测定液的色谱图
试样中苹果酸的含量为0.115 mg/g，柠檬酸三乙酯的含量为20.147 mg/g，其余12种原料均未检出。
结论
本实验以甲醇和磷酸氢二铵溶液为流动相，采用反相色谱法，使用梯度洗脱条件，通过对14种原料的理论塔板数、分离度、重复性、线性的测试以及对维生素E乳试样中各原料的含量进行测定，实验结果表明：
14种原料的理论塔板数范围为4805~181675，分离度均≥1.74，均具有良好的峰形；重复性测试中，14种原料混合标准溶液连续进样7针，保留时间的RSD范围为0.00 %~0.13 %，峰面积的RSD范围为0.13 %~0.49 %，均具有良好的定性定量重复性；14种原料在测定浓度范围内均具有良好的线性关系，确定系数R2＞0.999；维生素E乳试样测定中，苹果酸的含量为0.115 mg/g，柠檬酸三乙酯的含量为20.147 mg/g，其余12种原料均未检出。因此，悟空 K2025高效液相色谱仪可用于化妆品中葡糖醛酸等14种原料的含量测定。
新规实施在即，悟空为相关修订项目提供适配的方案支持，协同行业提升检测能力，服务于化妆品的安全与规范发展。
