前言
蛋氨酸羟基类似物（MHA）作为一种重要的蛋氨酸替代物，凭借良好的生物利用率、稳定性及成本优势，被广泛应用于饲料工业中，对促进畜禽生长发育、提高饲料转化率具有关键作用。饲料中MHA的含量直接关系到饲料营养价值、养殖效益及动物产品质量安全，因此，建立一种准确、高效、便捷的MHA含量测定方法具有重要的现实意义，此方法可为饲料行业的质量管控提供科学、可靠的技术手段。
《GB/T 19371-2025》主要变化
标准GB/T 19371-2025将于2026年3月1日起实施，代替GB/T 19371.2-2007 饲料中蛋氨酸羟基类似物的测定。与GB/T19371.2—2007相比，主要技术变化如下:
a
适用范围增加了精料补充料和混合型饲料添加剂；
b
流动相由三氟乙酸乙腈水溶液更改为甲酸乙腈水溶液；
c
更改了标准品的要求及相关规定；
d
增加了标准系列溶液要求；
e
精密度要求由5%更改为10%。
悟空K2025高效液相色谱仪可以满足《GB/T 19371-2025 饲料中蛋氨酸羟基类似物的测定 高效液相色谱法》中对饲料中蛋氨酸羟基类似物含量测定的需求。
原理
试样中的蛋氨酸羟基类似物用10%乙腈水溶液提取，氢氧化钾溶液水解，经反相高效液相色谱法配置紫外-可见光检测器测定，以保留时间定性，外标法定量。
仪器配置
K2025高效液相色谱仪：K2025P2二元高压输液泵、K2025AS自动进样器、K2025CO柱温箱、K2025UVD紫外-可见光检测器、Wookinglab色谱工作站。
色谱条件
色谱柱：C18（AQ）色谱柱，4.6 mm×250 mm，5 μm或者相当的色谱柱；
流动相：甲酸乙腈水溶液（含0.05%甲酸的5%乙腈水溶液）；
流速：1.0 mL/min；
进样量：20 μL；
洗针液：10 %乙腈水溶液；
柱温：30 ℃；
检测器及检测波长：检测器为紫外-可见光检测器，检测波长为210 nm。
实验结果
1.重复性测试结果
按照色谱条件进行采集，蛋氨酸羟基类似物标准溶液（浓度为20 μg/mL）的色谱图如图1所示，积分结果如表1所示。
图1 蛋氨酸羟基类似物标准溶液的色谱图
表1 蛋氨酸羟基类似物标准溶液色谱图积分结果
由表1中数据可知，蛋氨酸羟基类似物的保留时间为12.892 min，理论塔板数为18029，拖尾因子为0.90，具有良好的峰形。
将蛋氨酸羟基类似物标准溶液连续进样7针，叠加的色谱图如图2所示，结果见表2。
图2 蛋氨酸羟基类似物标准溶液连续进样7针叠加的色谱图
表2 蛋氨酸羟基类似物标准溶液连续进样7针重复性数据统计
由表2中数据可知，蛋氨酸羟基类似物标准溶液连续进样7针进行重复性测试，蛋氨酸羟基类似物保留时间的RSD为0.15 %，峰面积的RSD为0.23 %，具有良好的定性定量重复性。
2.仪器灵敏度测试结果
按照色谱条件进行采集，以浓度为1 μg/mL的蛋氨酸羟基类似物标准溶液作为灵敏度溶液，计算结果见表3。
3.含量测定结果
按照色谱条件，将蛋氨酸羟基类似物标准系列工作液上机测定，蛋氨酸羟基类似物在1 μg/mL~80 μg/mL浓度范围内呈现良好的线性关系，确定系数R2＞0.999。
蛋氨酸羟基类似物标准系列工作液叠加的色谱图如图3所示。
图3 蛋氨酸羟基类似物标准系列工作液叠加的色谱图
试样含量测定结果
按照色谱条件，对空白溶液、供试品溶液和供试品加标溶液进行采集，计算试样中蛋氨酸羟基类似物的含量。
空白溶液、供试品溶液和供试品加标溶液的色谱图如图4~图6所示。试样中蛋氨酸羟基类似物的含量计算结果如表4所示。
图4 空白溶液的色谱图
图5 供试品溶液的色谱图
图6 供试品加标溶液的色谱图
表4 试样中蛋氨酸羟基类似物的含量计算结果
经计算，市售饲料试样中蛋氨酸羟基类似物的含量为1.58×10-3 %，在重复性条件下获得的两次独立测定结果的偏差为6.8%，满足《GB/T 19371-2025 饲料中蛋氨酸羟基类似物的测定 高效液相色谱法》中规定的该值不超过10%的要求；加标回收实验中，蛋氨酸羟基类似物的加标回收率为96.3%。
结论
本文使用悟空K2025高效液相色谱仪测定饲料中蛋氨酸羟基类似物的含量。实验以甲酸乙腈水溶液为流动相，使用反相色谱法配置紫外-可见光检测器进行测定，实验结果表明：
1
氨酸羟基类似物的保留时间为12.892 min，理论塔板数为18029，拖尾因子为0.90，具有良好的峰形；
2
蛋氨酸羟基类似物标准溶液（浓度为20 μg/mL）连续进样7针进行重复性测试，蛋氨酸羟基类似物保留时间的RSD为0.15 %，峰面积的RSD为0.23 %，具有良好的定性定量重复性；
3
灵敏度测试中，蛋氨酸羟基类似物的仪器检出限为0.076 μg/mL，仪器定量限为0.253 μg/mL；方法定量限为2.53×10-4 %满足《GB/T 19371-2025 饲料中蛋氨酸羟基类似物的测定 高效液相法》中配合饲料、浓缩饲料、精料补充料的定量限为0.03 %，添加剂预混合饲料和混合型饲料添加剂的定量限为0.1 %的要求；
4
蛋氨酸羟基类似物在1 μg/mL~80 μg/mL浓度范围内呈现良好的线性关系，确定系数R2＞0.999；
5
市售饲料试样中蛋氨酸羟基类似物的含量为1.58×10-3 %，在重复性条件下获得的两次独立测定结果的偏差为6.8%，满足《GB/T 19371-2025 饲料中蛋氨酸羟基类似物的测定 高效液相色谱法》中规定的该值不超过10%的要求；加标回收实验中，蛋氨酸羟基类似物的加标回收率为96.3%。
因此，悟空 K2025高效液相色谱仪可以满足《GB/T 19371-2025 饲料中蛋氨酸羟基类似物的测定 高效液相色谱法》中对饲料中蛋氨酸羟基类似物含量测定的需求。
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