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分不清磷酸化位点怎么办?这些命名要点帮你轻松通关!

分不清磷酸化位点怎么办?这些命名要点帮你轻松通关! 云南泽浩
2024-01-16
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导读:不愿透露姓名的某同学:小P,我最近想找个ULK1的磷酸化抗体,我看文献上ULK1修饰位点怎么都不一样啊。有的


不愿透露姓名的某同学:


小P,我最近想找个ULK1的磷酸化抗体,我看文献上ULK1修饰位点怎么都不一样啊。有的写的Ser555,Ser757,有的又写的Ser556,Ser758。而序列上并没有两个相邻的丝氨酸位点,这给我整迷糊了,到底是哪个位点的修饰啊!(有图有证据)


图1:ULK1的丝氨酸修饰位点[1-3]


小P:


这个我刚好知道一点。

不愿透露姓名的某同学(求知欲):


我就知道你知道。怎么回事,快说说。

小P:


嘿嘿,其实是这样的...


我们所说的X位点的磷酸化,一般都是通过其位点在序列的相对顺序来命名。像我们熟知的AKT的Thr308和Ser473修饰位点,就是按氨基酸在其序列的顺序来命名的。但是,还有一些并不是直接按照氨基酸序列来的,主要有下面3种。


去掉甲硫氨酸的命名

根据蛋白特性,蛋白在翻译后修饰行使其功能时,会将其第一个氨基酸甲硫氨酸去掉。比如组蛋白类的磷酸化修饰,去掉甲硫氨酸的命名,命名就会错位一个。

示例:

Histone H3 磷酸化Ser10(货号:66863-1-Ig)在序列上其实是第11个氨基酸。去掉甲硫氨酸后则为第10个氨基酸。

图2:去掉甲硫氨酸的命名


去掉信号肽的命名

一些定位在不同细胞器的蛋白或膜蛋白由信号肽引导其运输。这些蛋白磷酸化命名则会去掉这一段信号肽。表皮生长因子受体 (EGFR) 是受体酪氨酸激酶 (RTK) 之一。它定位于细胞膜,结合 EGF 家族的配体并激活多个信号级联,将细胞外信号转化为适当的细胞反应。其N端存在1-24 aa的信号肽。去掉或不去掉信号肽磷酸化位点命名如下图3。

图3:去掉信号肽的命名


胰岛素受体(insulin receptor,INSR)存在两个isoform。以不同isoform命名的磷酸化位点又不一样了,加上其还有1-27 aa的信号肽,导致同一个位点有4个不同的命名。从文献报道和各公司产品来看,INSR常用的是去信号肽命名方式,两个isoform的命名都会遇到。但其本质上修饰位点前后序列都是一致的。

图4:INSR去掉信号肽的命名和全长的命名


不同种属命名

同一蛋白不同种属在同一位点的修饰,因其氨基酸长度及序列不完全一致,最后的位点也会有一些差异。同一蛋白在人和小鼠中,氨基酸长度一般会相差零到几十个氨基酸。

例如IRS1,按人的氨基酸序列和按鼠的氨基酸序列同一修饰位点,命名却不一样。人Ser307和小鼠 Ser302对应的是同一个位点,后面的Ser312等依此类推。值得注意的是,如果研究的是人 Ser307位点的修饰,而购买了以小鼠为免疫原Ser307的磷酸化抗体,则和所要研究的位点不一致,研究结果也不可预期了。在此蛋白中还要注意的是,同样是612位点,在人和小鼠中的氨基酸序列却不一样。

图5:不同种属命名区别


小P:


话说回来,ULK1的磷酸化抗体知道如何选购了吗?

不愿透露姓名的某同学:


明白了!文献使用的抗体免疫原用的不同种属。所以人ULK1 Ser556等同于小鼠Ser555;人ULK1 Ser758等同于小鼠Ser757。


因此在选购抗体的时候,一定要注意抗体免疫原序列是来自人的还是小鼠的,有没有去掉甲硫氨酸或者信号肽命名,位点是否和自己要研究的一致,这些信息都可以参考Uniprot(注:Uniprot对修饰位点的描述是按完整序列,即包含甲硫氨酸、信号肽)。

当然,磷酸化位点命名不只有这几种,还有一些特殊的命名。比如RNA聚合酶II中的POLR2A蛋白存在七肽重复序列,磷酸化修饰命名则以七肽的相对位置,命名为Ser2,Ser5和Ser7。大家在研究中还遇到什么有趣的位点命名方式呢?评论区留言一起讨论吧。

Proteintech也有百种磷酸化抗体,为帮助科研人员精准选购抗体,我们在这些有不同命名方式的靶标下进行了注释。

此外为了方便大家比对和查询,小P特地准备了Proteintech对不同氨基酸位点、不同蛋白质的磷酸化抗体的命名规则。如果对蛋白的修饰和抗体的命名还是有疑问,也可以咨询我们的售前客服。


为了方便大家查找,小P准备了一些常用的相关抗体推荐列表,希望可以帮助大家更轻松寻找到靶标!


【参考文献】(上下滑动查看更多)

[1] Li Z, Gao F, Lan Y, et al. Porcine Hemagglutinating Encephalomyelitis Virus Triggers Neural Autophagy Independently of ULK1. J Virol. 2021 Sep 9;95(19):e0085121. doi: 10.1128/JVI.00851-21. Epub 2021 Jul 21. PMID: 34287052; PMCID: PMC8428410.

[2] Qin ZL, Yao QF, Zhao P, et al. Zika virus infection triggers lipophagy by stimulating the AMPK-ULK1 signaling in human hepatoma cells. Front Cell Infect Microbiol. 2022 Nov 2;12:959029. doi: 10.3389/fcimb.2022.959029. PMID: 36405969; PMCID: PMC9667116.

[3] Shang L, Chen S, Du F, et al. Nutrient starvation elicits an acute autophagic response mediated by Ulk1 dephosphorylation and its subsequent dissociation from AMPK. Proc Natl Acad Sci U S A. 2011 Mar 22;108(12):4788-93. doi: 10.1073/pnas.1100844108. Epub 2011 Mar 7. PMID: 21383122; PMCID: PMC3064373.







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