细胞治疗 “生命线”：细胞健康与代谢检测方案

我的细胞是否存活？

我的细胞在增殖吗？

简便的、基于微孔板的"添加-混合-检测"模式 Lumit®hKi-67 免疫检测系统使用常见标志物 Ki-67 来测量细胞增殖。该检测法克服了其他常用技术相关的挑战，例如繁琐的洗涤步骤、代谢活性对增殖结果的误导性，以及需要专用设备。它可帮助您减少劳动力和准备时间，更快做出决策，并增强对数据的信心。

上图.以每孔80,000个细胞铺板的人CD8+ T细胞（StemCell Tech公司），分别使用含（橙色）与不含（蓝色）10ng/ml IL-2的CD3/CD28 T细胞激活剂处理48小时。通过Lumit^® hKi-67免疫检测系统观察到在T细胞增殖启动前（激活后72小时才开始增殖）Ki-67表达已上调，证明该检测可作为增殖的早期指标。

我的细胞代谢状态良好吗

细胞代谢在细胞治疗开发与生产过程中至关重要，因为它影响细胞生长、分化及功能，这些对于生产高质量的治疗性细胞必不可少。理解和优化代谢通路可以提高细胞产量、活力及治疗效果，从而确保细胞治疗的成功与可扩展性。我们提供一系列灵敏的"加样-读取"操作模式的生物发光检测法，用于测量代谢活性，包括葡萄糖摄取、乳酸、谷氨酰胺、氧化应激和NAD(P)H。

细胞代谢状态可通过以下方式评估：

• 监测细胞培养基中代谢物的变化

• 分析细胞内关键代谢辅因NAD(P)/NAD(P)H及代谢物

• 测量脱氢酶（主要代谢通路的关键调控因子）的活性

NAD(P)H-Glo™检测系统的示例反应原理图。该检测法是一种生物发光、均质的单一试剂添加检测法，可定量监测酶促反应中NADH 和NADPH 还原形式的浓度。氧化形式NAD⁺和NADP⁺不被检测且不干扰发光信号。

与其他类型T细胞相比，具有干细胞记忆表型（Tscm）的T细胞以在体内长期存续并维持功能而著称。Tscm细胞的生成为免疫疗法（如CAR-T）带来了重大前景。使用细胞健康与代谢检测法优化和监测培养条件，有助于识别Tscm富集的预测性标志物，从而获得更多所需的Tscm细胞。此外，代谢测量可作为T细胞表型特征的早期预测指标。

活化T细胞的代谢特征因培养条件而异。更多数据请参见此海报：优化T细胞活化方案以富集干细胞记忆表型。

人间充质干细胞疗法的成功取决于扩增出代谢状态良好、适于体内功能的细胞。在扩增过程中监测营养物质（如葡萄糖消耗和乳酸生成）、氧化磷酸化以及细胞内谷氨酰胺和谷氨酸水平，对于实现一致且均匀的细胞扩增至关重要。

上图. 在由DASbox^®微型生物反应器系统控制的BioBLU® 0.3c一次性生物反应器中培养hADSC细胞5天的葡萄糖消耗量（图A）和乳酸分泌谱（图B）。数据代表六个生物反应器的平均值（n=6），并显示Glucose-Glo™和Lactate-Glo™检测法生成的谱图与YSI生物分析仪所生成的谱图一致。

上图. 细胞内代谢物水平。在第5天将细胞从微载体上取出，并与第0天进行比较。在384孔低体积板中对总计3,000细胞/孔进行了分析。使用代谢物检测法对乳酸（图A）、苹果酸（图B）和谷氨酰胺/谷氨酸（图C）进行了检测。数据代表六个生物反应器的平均值（n=6）。

下载此应用说明以查看更多数据：在搅拌罐生物反应器中培养的人间充质干细胞用于细胞治疗应用时的代谢表型保留情况及适用性。

点击查看以下Promega细胞活力检测法在细胞治疗开发中应用的精选文献：

Li, H.K. et al. (2023) A novel allogeneic Rituximab-conjugated gamma delta T cell therapy for the treatment of relapsed/refractory B-cell lymphoma. Cancers 15, 4844.

使用产品：CellTiter-Glo® 2.0细胞活力检测法用于测量新型同种异体利妥昔单抗偶联γδ T细胞对表达CD20的癌细胞的杀伤作用。

Dahlke, J. et al. (2021) Efficient genetic safety switches for future application of iPSC-derived cell transplants. J. Pers. Med. 11, 565.

使用产品：CellTiter-Glo® 2.0细胞活力检测法用于评估经修饰并被诱导表达自杀基因的iPSCs在体外的消融情况。

Kuo, Y.-C. et al. (2022) Antibody-based redirection of universal Fabrack-CAR T cells selectively kill antigen bearing tumor cells. J. Immunother. Cancer 10, e003752.

使用产品：CellTiter-Glo®发光法细胞活力检测法用于测量CAR-T细胞在体外对靶肿瘤细胞的杀伤作用。

Wu, Y. et al. (2022) A new immunotherapy strategy targeted CD30 in peripheral T-cell lymphomas: CAR-modified T-cell therapy based on CD30 mAb. Cancer Gene Ther. 29, 167-177.

使用产品：LDH-Glo™细胞毒性检测法应用于CD30重定向CAR-T细胞对外周T细胞淋巴瘤细胞的体外细胞毒性评估。

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