血清知识大盘点- 大数跨境

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血清知识大盘点

云南泽浩

2020-04-10

导读：由于血清来源于动物，且含有细胞培养中所需的各种营养（血浆蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生长因子、激素、无机物

由于血清来源于动物，且含有细胞培养中所需的各种营养（血浆蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生长因子、激素、无机物等），这奠定了血清是细胞培养实验中最普遍的试剂的基础。

目前血清采集地主要分布在以下国家：

市面上的牛血清产品名称虽然五花八门，但根据其不同的特性，追其根本，大致可分为以下四种。根据牛的取血年龄可以区分：

胎牛血清（Foetal Bovine Serum，简称FBS）指的是取自未出生，母牛剖腹心脏穿刺采血得来的血清。

国产胎牛血清（并无明确定义，但通常用此命名）指的是出生4-6小时，且未进行哺乳（unsuckled）进食的新生牛，有时还称作国产新生牛血清。

新生牛血清（Newborn Calf Serum，简称NBCS，或称小牛血清）指的是出生14天-3个月进行取血的牛血清。

成年牛血清（Adult Bovine Serum，简称ABS）指的是取血时牛龄通常超过12个月的牛血清。

以上取血牛龄的差异主要是受当地国家畜牧业的发展及法规限制影响，因为牛血多为畜牧业副产业，并未有专门为取血而养的牛。

几种血清的比较：

项目	等级
提取血清体积/只牛	成年牛血清(5-8L) > 小牛血清 (2L) > 国产胎牛血清 (1L) > 胎牛血清 (0.5L)
培养细胞的效果	胎牛血清 > 国产胎牛血清 > 小牛血清 > 成年牛血清
价格	胎牛血清 > 国产胎牛血清 > 小牛血清 > 成年牛血清

这几种不同牛龄血清所含的促细胞生长因子、促贴附因子、激素及其他活性物质等组分与比例不同。常规来说，年龄越小的牛血清，细胞培养效果越好。胎牛血清培养效果好于新生牛，且因为胎牛未进食过母乳，所以IgG含量低。故目前多数实验人员选择的都是胎牛血清进行细胞培养。

胎牛血清根据实验要求的不同又进行了特殊加工工艺加工，那么在这么多种类的血清面前，要怎么选择适合自己细胞培养的那一款呢？

★ 我们需要知道都有哪些种类的牛血清和它们的用途：

透析血清

分子量小于10,000的分子如氨基酸、葡萄糖、盐离子和未结合的蛋白均被移除。透析血清主要用在进行营养成分优化和标定特定成分进行研究的实验中。

碳吸附血清

使用活性和右旋糖苷去除血清中的亲脂类(lipophilic)物质，如某些激素、细胞因子、生长因子等，去除作用对分子量大小并无区分。碳吸附胎牛血清常用于体外培养研究验证激素的作用效果。

去外泌体血清

适用于收集细胞分泌的外泌体时使用。

低IgG血清

用于研究抗体、病毒和病毒反应、细胞表面抗原表位。

四环素血清

应用于使用敏感四环素诱导表达系统的细胞培养(Tet-on, Tet-off)，以及其它对四环素敏感的实验中。

IR (辐照)

钴60伽马辐照剂量在3.5Mrad. 通过直接与间接作用将生物大分子（如核酸）键结破坏，人畜用药物/疫苗，及对微生物负荷(Bioburden)要求最高水平的实验。

HI (热灭活)处理血清

56℃, 30Min, 破坏补体，确保细胞与抗体结合不会发生裂解。

胚胎干细胞（ES）专用血清

是从多个批次的胎牛血清筛选出特定批号，适用于人及小鼠胚胎干细胞、成体干细胞及原代细胞长期培养。

间充质干细胞（MSC）专用血清

从多个批次的胎牛血清筛选出特定批号，经过骨髓，脂肪组织及脐带来源的间充质干细胞的细胞活性严格测试，通过传代及分化比例测试。

其他动物血清

马血清

10%马血清可代替FBS用于支持SRBC的体外抗体应答, 常与牛血清结合或单独作为哺乳动物细胞培养的补充培养基。

猪血清

猪血清在染色体研究中表现非常出色，可用于淋巴细胞培养, 疫苗生产（生产支原体）, 中和脂质体包裹的腺相关病毒（AAV）, 用于诱导大鼠肝纤维化, 作为酶联免疫吸附试验（ELISA）中的标准阴性参考。

兔血清

正常兔血清可作为免疫分析的阻断剂和对照。在免疫组织化学和免疫细胞化学方面，各种研究均采用20%或1:200稀释兔血清作为阻断剂。

羊血清

用于生物医学研究的大多数细胞系和原代培养物上，FBS的合适替代物，病毒分离和鉴定，病毒学研究。
用作鱼类细胞培养的有效NBCS替代物。
可成功地代替胎牛血清在生长培养基中长期用于环孢蘑菇的体外繁殖。

胎牛血清成分已知的已有上千多种，以下为主要成分表：

成分	浓度	成分	浓度
蛋白和多肽	-	磷脂	0.7-3.0 mg/ml
白蛋白	20-50mg/ml	丙酮酸	2-10 ug/ml
胎球蛋白	10-20mg/ml	碳水化合物	-
纤连蛋白	1-10 ug/ml	葡萄糖	0.6-1.2 mg/ml
球蛋白	1-15 mg/ml	乳酸	0.5-2.0 mg/ml
α-抗胰蛋白酶	0.5-2.5 mg/ml	多胺
转铁蛋白	2-4 mg/ml	丁二胺,亚精胺	0.1-1.0 uM
生长因子	-	尿素	170-300 ug/ml
EGF, PDGF, IGF-I, IL-1	1-100 ng/ml	无机物	-
氨基酸	0.01-1.0 uM	钙，氯化物，钾，磷	-
脂质	-	激素	-
胆固醇	10 uM	胰岛素	1-100 ng/ml
脂肪酸	0.1-1.0 uM	皮质醇	10-200 nM
亚油酸	0.01-0.1 uM	维生素	10 ng-10ug/ml

各位老师可以根据自己的实验需求选择不同的血清。

★ 我们同时为您收集了一些使用血清时的典型问题：

血清的颜色如何？

为何有的胎牛血清颜色偏红，而有的偏黄？是因为胎牛血清颜色是由血红蛋白（鲜红）和胆红素（黄）决定的，主要是受血红蛋白影响。血红蛋白含量很低时，含少量胆红素，呈淡黄或金黄。血红蛋白含量高时，会呈现淡红色。

需要长期保存的血清必须储存于-20℃冰箱（未开封血清有效期为5年）。若存放于4℃，请勿超过1个月，若一次无法用完一瓶，建议将血清无菌分装并冷冻。

血清如何解冻，使用前是否需要过滤？

血清解冻需采用逐步解冻法：将血清从-20℃冰箱放入4℃冰箱中溶解一天，然后移入室温，待全部溶解后再分装。在溶解过程中需不断轻轻摇晃均匀（小心勿造成气泡），减少沉淀生成。切勿直接将血清从-20℃转入37℃解冻，这样因温差较大易造成蛋白质凝结并出现沉淀。

本公司血清在ISO13485认证的厂房中生产，经过3次0.1μm过滤，出厂经过检测并且会使用三种以上的细胞株进行培养测试及无菌检测，污染几率非常非常非常（重要的事情说三遍）低。通常细胞污染有非常多的可能性，根据协助使用者进行分析检测，结果表明绝大部分都是因人为操作失误导致污染。因此买来的血清不需要再次进行过滤。

下图为人肉眼和光学显微镜所能观察到的微粒大小。由于我们的血清是经过3次0.1μm过滤，因此若肉眼可以观察到异物时，可以考虑：

是否血清溶解后蛋白质凝集
是否操作时导入污染物

为什么血清中会有沉淀生成，主要成分是什么，会对实验有什么影响？

血清中沉淀主要有：纤维蛋白（絮状沉淀），胎球蛋白^[1]，脂蛋白，冷凝集素，玻连蛋白，磷酸钙（显微镜下小黑点沉淀），胆固醇等。

原因：造成沉淀的主要原因是温度的改变。热灭活，反复冻融，长期储存于2-8℃或者室温。

预防：非必要，不用热灭活；避免反复冻融；-20℃保存；4℃全融（期间间断摇晃均匀）；2000rpm离心5分钟(不建议用0.2um滤膜过滤），取上清使用。

关于血清

根据多年的实验研究显示，血清中的沉淀物不会影响细胞培养。

BI原厂，ATCC（美国菌种保藏中心）实验也是相同的结果。

BI原厂链接：http://www.bioind.com/support/product-faqs/fbs-faqs/

美国ATCC：https://www.atcc.org/

黑胶虫是来源于血清吗？

目前科学界对黑胶虫的身份并无定论, 通常是显微镜下观察到密密麻麻的小黑点在培养基中自主游动，就称为黑胶虫污染。本公司技术服务部”Dr.Cell” 目前检测的数十个所谓”黑胶虫”样本，其中62%为细菌（如Sphingomonas paucimobilis，Blastomonas natatoria strain），38%为支原体（如：Mycoplasma hyorhinis，Mycoplasma pulmonis strain）。黑胶虫在镜下的典型特征呈卵圆状、球状、杆状等，可引起细胞生长迟缓或裂解凋亡。目前没有充分的数据表明黑胶虫来源于血清，因为其尺寸远大于血清过滤时所用的0.1微米(μm)滤膜。建议各位老师通过使用三抗（Cat#: 03-032-1B）外加支原体处理试剂（Cat#: 03-038-1B）尝试杀灭黑胶虫。