伴随着春天的脚步，萤光素酶生物传感器技术（Luciferase Biosensor Technology）也迎来了其 30 岁的生日。1990 年技术诞生，1993 年 Promega 第一个萤光素酶（又称荧光素酶）专利获批， 到 1996 年 Promega 的 Dual-Luciferase® Reporter Assay System 双萤光素酶报告基因检测系统的推出，为研究者的实验提供了更加可靠的工具，成为萤光素酶技术历史上的里程碑事件，也奠定了 Promega 在此领域中的地位。
生物发光技术帮助科学家研究从前在活细胞中无法检测到的活性变化，并成为放射性技术的重要替代方法。之后 Promega 不断在萤光素酶技术拓展推陈出新。1999 年 CellTiter-Glo® Luminescent Cell Viability Assay 产品发布，成为 20 年来最为经典的细胞活力检测工具，也是现在药物研发领域细胞活力检测的金标准。
2012 年迎来革新性的萤光素酶 NanoLuc® Luciferase 的诞生，并成为当年 The Scientist 杂志评选的全球十大创新技术，NanoLuc® Luciferase 只有 19 KD，是目前世界上最亮的萤光素酶，其独特的特性加上 Promega 的雄厚研发实力和经验，使萤光素酶技术跨入了更广阔的应用领域。如果历数萤光素酶的前世今生真的是个长长的故事。我们容后再详述，大家可以期待一下哦。
为什么要选择双萤光素酶报告基因，双萤光素酶报告基因检测到底有哪些优势呢？萤光素酶报告基因检测数据如何归一化 ？
Normalizing Genetic Reporter Assays: Approaches and Considerations For Increasing Consistency And Statistical Significance
By Trista Schagat, Ph.D., Aileen Paguio, M.S., And Kevin Kopish, B.S., Promega Corporation
选择双萤光素酶报告基因时该如何选择海肾内参载体呢?
pGL3 和 pGL4 系列载体有啥区别？
做 miRNA 靶基因研究，选择哪个载体合适？
pmirGLO Dual-Luciferase miRNA Target Expression Vector（E1330）是为 miRNA 靶标研究而设计的载体，可通过将 miRNA 的靶序列插入到主报告基因萤火虫萤光素酶基因（luc2）的下游或者 3'端而实现。
萤火虫萤光素酶表达的下降意味着内源性的或外源引入的 miRNA 与克隆的 miRNA 的靶序列发生了结合。这一载体是基于 Promega 的双报告基因技术，萤火虫萤光素酶基因（luc2）作为主报告基因，用于监控 miRNA 的调节，海肾萤光素酶基因（hRluc-neo）作为内参 报告基因，用于进行归一化处理和稳定转染的筛选标记。
与 psiCHECK™-2 载体相比有以下特点/优点：pmirGLO 载体主报告基因所带的启动子 PGK 为中等强度的启动子；载体上带有 Neo 抗性基因，可作为稳定转染筛选标记；主报告基因为萤火虫萤光素酶基因，更符合大部分人的使用习惯。
psiCHECK™-2 Vector（C8021）最初是为验证 siRNA 靶标设计的。该载体用海肾萤光素酶（hRluc）作为主报告基因；萤火虫萤光素酶（hluc+）则作为内参 报告基因，用于进行归一化处理。目的基因被克隆至海肾萤光素酶翻译终止密码子下游的多克隆位点。由合成的 siRNA 或体内表达的 shRNA 引发的针对目的基因的 RNAi 过程，导致融合 mRNA 的剪切和随后的降解。也有文章中用 psiCHECK-2 进行 miRNA 研究。
但与 pmirGLO 载体相比，有以下两个缺憾：1. 酶切位点少；2. SV40 启动子活性高，用于调节效果明显的 siRNA 可行，而当 miRNA 抑制作用比较弱时，不容易观察到明显的变化。由于 miRNA 的调节作用通常是微量调节，使用中等强度启动子驱动报告基因表达的载体（如 pmirGLO 载体）通常更合适一些。
萤火虫萤光素酶检测试剂盒有很多，要如何选择呢？
实验通量大时，建议选择信号更稳定、均质型（Homogenous）的检测系统；
样品中萤光素酶含量低时（难转染细胞模型等），建议选择信号强度高的检测系统；
有自动加样设备时，可以用闪光型（Flash）系统进行较多样品的检测，否则辉光型（Glo）系统操作更简便、结果更稳定；
培养的动物细胞适用于所有检测系统，非动物细胞样品首选非均质型检测方法；
非均质型试剂可以在任何规格的孔板培养细胞；均质型试剂推荐在 96/384 孔板中培养细胞，或与 Glo lysis Buffer（Cat#E2661）配合使用，采取非均质方式检测。
萤光素酶检测需要使用什么仪器？
Promega 的新品 NanoLuc® 萤光素酶与经典萤火虫萤光素酶和海肾萤光素酶相比，到底有哪些特点和优势呢？
