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细胞学堂 | 如何培养大鼠心肌细胞H9C2?

细胞学堂 | 如何培养大鼠心肌细胞H9C2? 云南泽浩
2023-02-14
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导读:图1:BCRC中H9C2细胞形态■ H9C2细胞由KIMES B和BRANDT B从BD1X大鼠胚胎心脏组织


图1:BCRC中H9C2细胞形态


■ H9C2细胞由KIMES B和BRANDT B从BD1X大鼠胚胎心脏组织的克隆细胞株亚克隆得到;表现出许多骨骼肌的特性。

■ 这个细胞株中的成肌细胞能融合形成多核的肌管,并对乙酰胆碱的刺激发生反应。

■ 如果培养基中的血清浓度下降到1%,融合很快发生。



本文为大家介绍H9C2的培养条件及注意事项



图2:赛库H9C2细胞形态




培养条件




■ 生长特性:贴壁

■ 形态特征:成纤维细胞样

■ 培养条件:DMEM(改良型) +10%胎牛血清(进口南美级别)

■ 传代比例:1:3传代(培养面积比)

■ 传代方式:消化1分30秒

■ 换液频率:2~3天换液1次

■ 冻存液配方:DMEM(改良型)+10%FBS+10%DMSO

■ 培养要点:建议使用改良型DMEM培养基培养



 常见问题




01


为什么会出现空泡?

可能是铺板时铺得不够均匀,局部过于密集,密集地方的细胞状态会变差、空泡增多。也可能是血清品质较差,要更换优质血清,及时换液




02


为什么细胞长得慢?

a

细胞密度低或细胞铺得不均匀,细胞长不起来,可以先培养,然后消化重新种瓶,提高密度培养或直接重新消化接种培养。

b

操作时力度没控制好,力度过大将细胞吹碎,状态变差。

c

血清品质较差,影响细胞生长,建议更换高品质血清。



03


H9C2细胞状态差,容易漂?

a

可能是血清问题,建议换高品质血清,并注意血清要程序解冻,不能水浴化开;

b

也有可能是细胞没铺匀,局部生长密集,需要及时传代,并不是细胞长满才传代,当有个别地方长得过于密集,容易叠加的时候应该就要传代了。




参考文献

[1] Li Y,  Fu L,  Zhang J, et al. CircularRNA circ_0071269 knockdown protects against from diabetic cardiomyopathy injury by microRNA-145/gasdermin A axis[J]. Bioengineered, 2022, 13(2):2398-2411.  

DOI:10.1080/21655979.2021.2024688

[2] Liu X, Wang M,  Li Q, et al. CircRNA ACAP2 induces myocardial apoptosis after myocardial infarction by sponging miR-29[J]. Minerva Medica, 2020. 

DOI:10.23736/S0026-4806.20.06600-8

[3] Sun L, Wang H, Xu D,  et al. Lapatinib induces mitochondrial dysfunction to enhance oxidative stress and ferroptosis in doxorubicin-induced cardiomyocytes via inhibition of PI3K/AKT signaling pathway[J]. Bioengineered, 2021, 13(1). 

DOI:10.1080/21655979.2021.2004980

[4] Wen Z,  Mai Z,  Zhu X,  et al. Mesenchymal stem cell-derived exosomes ameliorate cardiomyocyte apoptosis in hypoxic conditions through microRNA144 by targeting the PTEN/AKT pathway[J]. Stem Cell Research & Therapy, 2020, 11(1).

DOI:10.1186/s13287-020-1563-8    (此文献H9C2细胞购自赛库生物)



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