细胞为啥总是一言不合就抱团生长?!
是细胞污染了还是正常现象?
是消化不好了还是铺板有问题?
抱团细胞越来越多,怎么样才能让细胞分开生长?
请认真阅读以下干货,看看能否帮您答疑解惑!
细胞抱团一定代表细胞状态不好吗?
细胞生长的时候肯定是要相互联系,大部分的细胞都是要成片生长的,应该仔细观察每种细胞的状态,抱团并不一定代表不好:
若细胞轮廓清晰,可看清楚一个个的细胞,像葡萄一样,一串串的,就是状态好的,说明细胞在分裂。
但大部分细胞抱团绝对不是一件好事!如果轮廓消失,出现细胞融解或细胞变灰暗、透光性变差,就是细胞死亡了。葡萄状和抱团,在镜下其实很容易区别。抱团死亡的细胞可以看到细胞碎片,如下图:

RAW264.7细胞-正常状态

RAW264.7细胞-异常状态

H9c2细胞-正常状态

H9c2细胞-异常状态
细胞抱团是因为细胞污染了吗?一般细胞培养液清亮,就不是污染。如果是污染了的话,可以通过观察培养液颜色,若污染,则很浑浊。
细胞为啥总是喜欢抱团?
如何避免细胞抱团?
用无钙镁平衡盐溶液洗涤细胞。(VivaCell:C3580-0500)
对于贴壁非常牢固的细胞(如MDCK),为了细胞更好的状态,更漂亮的样子,建议分多批多次消化,这样才能最大限度地降低胰酶对细胞的损伤,保证细胞的状态能够最优。
细胞生长密度不要太高,70%-80%就好(细胞刚刚基本成单层细胞,没有出现堆叠生长),这样细胞抱团的几率就大大减少了。如果细胞已经长成集落,可先将细胞低密度传代,第二天再消化传代,这样连续传三次,细胞抱团就会越来越小,这样几代过后,再按照常规消化方法和时间能将细胞逐渐传成单个的。
消化过程中最好不要使劲摇动培养瓶,这样细胞特别容易成屑样脱落。细胞一旦脱落入悬液里就很难再将他吹打成单个(因为细胞没有受力点了,所以细胞很难分散开)。所以必须要在细胞未脱落之前将其吹打开,严格控制好消化程度。
消化过程需要使用枪头轻轻吹打,切忌使劲拍培养瓶的侧壁。拍瓶子想要将细胞拍散的力度对于细胞来说相当于大地震,细胞本身是无法承受如此振荡的。
细胞抱团了,要如何处理?
如果细胞抱团不影响生长就没问题,只是计数的时候要麻烦点了。
如果感觉有死细胞的DNA,在细胞悬液中加入几滴无菌的DNAse(1mg/ml溶于水)将DNA链打断。轻柔地吹打细胞,防止对细胞膜造成物理损伤。
如果细胞抱团是肉眼可见的,那就让细胞静置半分钟左右,然后吸取上半部分没有抱团的细胞悬液来传代。如果细胞抱团肉眼不可见,那可能没有特别好的分离方法,只能等细胞状态改善后将这部分细胞慢慢排除出去。
☆ 如若需要细胞进行抱团,那么该如何处理呢?
以MSC诱导成软骨方向分化为例:可使用96孔板,每个孔板接种30万个细胞。
注:细胞类型不同,要求也各不相同,大家可根据自身情况留言咨询哦~
引起细胞抱团的根本原因是细胞状态变差,且在吹打细胞的时候,那些状态好的细胞也会因为多次吹打而受损,所以我们认为最根本的解决方法是摸透培养的细胞的生长习性,让细胞保持较好的生长状态。
您也有相同的烦恼吗?
或是不会看您的细胞是否抱团了~
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