轻松搞定贴壁细胞五大培养难题！- 大数跨境

云南泽浩

2023-07-11

导读：贴壁细胞（adherent cells），这类细胞的生长必须有可以贴附的支持物表面，如：培养（瓶）器皿壁上，

贴壁细胞（adherent cells），这类细胞的生长必须有可以贴附的支持物表面，如：培养（瓶）器皿壁上，细胞依靠自身分泌的或培养基中提供的贴壁因子才能在该表面上生长，繁殖。细胞一经贴壁就迅速铺展，然后开始进行有丝分裂，并很快进入对数生长期。

当细胞在该表面生长后，一般形成两种形态，即成纤维样细胞性或上皮样细胞。贴壁细胞生长过程分为五个时期，分别是游离期、贴壁期、潜伏期、对数期、平台期和衰退期。

贴壁细胞因其培养过程较为繁琐，所以培养时更容易出现问题。今天，逍鹏讲堂就围绕贴壁细胞培养中常见的5大常见问题，与大家一起探讨详细原因和解决方法，话不多说，我们开始吧！

传代后部分细胞漂浮

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原因及解决方法如下

传代后细胞变形

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原因及解决方法如下

变形，但细胞还在生长：可能是血清批次不一样导致，血清成分复杂，不同批次和品牌间均存在成分差异，影响细胞状态。建议使用同一批次血清，更换血清时需与原血清比例混合后使用，使细胞有过渡期；
变形，但细胞不长，且碎片增多：可能传代操作过程损伤，常见于消化不当，或者潜在支原体等污染导致细胞病态；消化时间根据每个细胞的状态来调整，消化过度或者消化不充分均会对细胞造成影响；培养过程应严格无菌操作，实验环境尽量洁净，确保细胞无外源污染。

细胞生长周期变慢，边养边漂

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原因及解决方法如下

细胞传代时密度太稀或太密：建议细胞融合度达80%左右进行传代，传代密度适中，密度过低会延长生长周期，密度过高会有接触抑制；
传代操作不当：根据细胞特性决定细胞消化时间，一般在显微镜下观察细胞回缩变圆并有少量细胞脱落即可终止消化，难消化的细胞可分次消化，每次时间不超过5min；频繁换液或者清洗细胞也会导致细胞状态变差，常规换液时间间隔为2~3天。

传代后细胞成团

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解决方法如下

细胞出现空泡

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原因及解决方法如下

< 总结 >

如何促进细胞贴壁

适度消化细胞：HepG-2、A549、Hela、SGC-7901几种癌细胞处理时间可适当放长，一般处理5-6min，C2C12、COS-7、NIH-3T3比较容易脱落，2min足矣，P19Cl6和293细胞贴壁不紧，可在PBS漂洗后，直接换新鲜培养基打散。
最好用塑料瓶培养，如果是玻璃瓶,那么可以用鼠尾胶原包被一下培养瓶，或者用盐酸对培养瓶进行蚀刻，或者涂Laminin/fibronectin/collagen/BSA，也可以帮助细胞贴附新的培养瓶，细胞不易贴壁，建议加多聚赖氨酸处理。
正确配制消化液或培养液。
使用合适的细胞外基质或贴壁试剂。
复苏新的细胞，第一周用20%血清帮助细胞复原。
传代接种一定要铺的均匀，避免细胞抱团生长。
细胞传代24小时之内，最好不要晃动，以免影响贴壁。
体内上皮细胞生长在胶原构成的基膜上，因此培养在有胶原的底物上有利于生长。人或小鼠表皮细胞培养，可以用γ射线照射后的3T3细胞为饲养层，另外降低pH、Ca2+含量和温度，均有利于上皮细胞生长。