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Wako基因编辑产品专题

Wako基因编辑产品专题 云南泽浩
2020-04-01
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导读:◆Cas9蛋白/gRNA共转染试剂GenomONE® -GEGenomONE® -GE是将Cas9 蛋白以及

◆Cas9蛋白/gRNA共转染试剂GenomONE® -GE

GenomONE® -GE是将Cas9 蛋白以及向导RNA(gRNA)导入细胞的转染试剂。简单地操作即可将Cas9 蛋白和gRNA导入细胞,无需电穿孔类似的特别装置。即使是转染十分困难的免疫细胞,也可以实现Cas9 蛋白以及gRNA的高效导入。

 

特点

● 导入困难的免疫细胞亦可导入Cas9 蛋白以及gRNA

● 只需混合试剂和离心两项简单操作,即可短时间制备导入载体

● 配合Donor DNA可实现敲入

● 可在生物安全等级1级的实验室中使用


应用实例

■ 向小鼠原代T细胞导入Cas9蛋白以及gRNA


从BALB/c小鼠提取的脾细胞用PMA/ionomycin刺激一天分离得到T细胞。使用GenomONE® -GE,其他公司产品A以及其他公司产品B将Cas9蛋白以及Cyclophilin B靶gRNA导入细胞。

48 h后,用T7 Endonuclease I assay验证基因编辑效率。


产品列表


◆蛋白转染试剂ProteoCarry

ProteoCarry可将蛋白以及葡聚糖等生物大分子导入细胞质。本品不存在蛋白滞留在内体或溶酶体中的问题,无需与蛋白进行预孵育,所以不会形成复合体,最小限度地限制其对蛋白功能的影响。


特点

● 基于肽特性的蛋白转染试剂,显示出高度水溶性。

● 优异的内体膜破坏活性,与传统方法相比显示出高细胞质传达性。

● 无需与导入物质进行预孵育,可以简便且迅速地转染。

● 由于不会与蛋白形成复合物,所以需要添加浓度较高的蛋白,但是可以最小限度地抑制对蛋白功能的影响。

● 只需要1小时的处理就可以充分地转染至细胞质。

● 有无血清(<10% FBS)不会影响导入效率,可以根据想要使用的细胞设计实验。

● 已有向细胞质导入各种蛋白及生物大分子的应用实例。

例:IgG抗体、功能性蛋白(Cre recombinase, Saponin)、多糖(葡聚糖)

● 推荐使用浓度几乎没有细胞毒性。


向细胞内导入FITC-dextran

向HeLa细胞导入FITC-Dextran(培养基的终浓度为200 μg/mL),仅向细胞添加FITC-Dextran时,(Reagent(-))观察到点状的荧光信号,细胞质中几乎没有观察到信号;相反,使用本产品时扩散到了整个细胞质。


产品列表


◆gRNA合成试剂盒

CUGA® 7 gRNA Synthesis Kit是对CRISPR/Cas9基因组编辑系统所需的向导RNA进行合成和纯化的试剂盒。通过使用CUGA® 7聚合酶(独立开发的T7 RNA Polymerase的突变体)进行体外转录,可以精确并且大量制备目的向导RNA。本试剂盒中包含用于体外转录反应的试剂,以及使用核酸纯化柱进行向导RNA纯化用的整套试剂。

 

特点

● 体外转录反应中可大量地合成gRNA。

● 使用专有酶进行精确转录。

● 具有与化学合成的gRNA相同的功能。


电泳比较

使用本产品和A公司的gRNA合成试剂盒合成sgRNA,并通过琼脂糖凝胶电泳比较纯化后的sgRNA。


【实验条件】

● 电泳样本:37℃反应2小时合成的sgRNA 250 ng

● 电泳凝胶:3% Agarose 21

● 2×Loading Buffer组成:95%甲酰胺

● 2×Loading Buffer组成:0.5mM EDTA

● 2×Loading Buffer组成:0.005% BPB

● 2×Loading Buffer组成:0.005% XC


【结果】本产品合成的sgRNA在电泳中为单一条带,可确认其为精准转录。


产品列表


◆Donor ssDNA合成试剂盒

可制备3~10 kb的长单链DNA。由于不进行PCR,核酸外切酶反应或逆转录等,不会产生内部或末端的变异和缺失,可以获得含有正确序列的Long ssDNA。


特点

● 可制备含有正确的目的序列的DNA

● 非长单链DNA杂质少

● 以切口酶(Nickase)酶切处理的质粒(Nicked Plasmid)进行琼脂糖电泳,分离目的单链DNA部分

● 试剂盒包含单链DNA专用胶回收试剂盒(Long ssDNA Gel Extraction Kit)

● 长链单链DNA可用作基因编辑的供体


操作方法


产品列表


◆Cas9单克隆抗体

本产品是来源于酿脓链球菌(Streptococcus pyogenes)重组Cas9蛋白的小鼠单克隆抗体。可用于Cas9的检测。


使用Cas9单克隆抗体进行Western blotting


产品列表


◆标签蛋白抗体

TARGET标签


PA标签


DYK标签:DYKDDDDK


 6×His标签


GFP tag:Green Fluorescent Protein(GFP)


HA tag:YPYDVPDYA


MBP tag:Maltose Binding Protein


c-Myc标签:EQKLISEEDL


GST标签:Glutathione-S-transferase


V5 tag:GKPIPNPLLGLDST


◆深层活体成像荧光素Aka Lumine

特点

● 近红外发光底物,λmax=675nm

● 不易受水和血红蛋白光吸收的影响,适用于活体深部的体内成像

● 被胸骨覆盖的深层器官(如肺部)也能成像

● 可以穿透血脑屏障,是少数能进行脑部成像的试剂

● 高度水溶性

● 灵敏度高,使用量仅为D-荧光素的1/10


使用了小鼠的活体成像实验数据


在含有LLC/luc皮下肿瘤的小鼠腹腔内使用100 μL底物D-luci及AkaLumine-HCl,15分钟后对所得的发光图像及肿瘤发光强度进行定量分析 (n=4,*P<0.05)。对小鼠使用D-luci并获得发光图像后4小时,对同一实验对象使用AkaLumine HCl,得到如图所示的发光图像。


产品列表

※ 仅供实验使用,不可用于临床诊断。

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