CGS Exo-spin™ 试剂盒是专用于提取细胞上清、尿液、唾液、血清、血浆等其他生物体液中外泌体的试剂盒， 通过沉淀和SEC（尺寸排阻色谱）即可从样本中获取大量结构完整的外泌体，操作快速简便，收获外泌体产率高、纯度高。相较于传统的超速离心法，大量节省实验时间。
▌试剂盒选用 | 血清、血浆
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CGS Exo-spin kit |
柱床长度 |
处理样本量/柱 |
试剂盒 |
适用样本类型 |
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EX02 mini blood |
1.3 cm |
100-500 μL |
SEC管柱、沉淀剂、PBS |
血清、血浆 |
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EX03 mini columns |
1.3 cm |
100 μL |
SEC管柱 |
血清、血浆 |
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EX05 mini-HD |
6.35 cm |
150 μL |
SEC管柱 |
血清、血浆 |
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EX04 midi |
2.15 cm |
1 mL |
SEC管柱 |
血清、血浆 |
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EX07 Exo-spin 96 |
1.3 cm |
100-500 μL |
SEC管柱 |
血清、血浆 |
▌试剂盒保存
产品常温运输。收到产品后，请于4℃保存，可以稳定保存一年。
▌操作流程
高通量提取操作流程
▌血清样本（ 100-500 µL）-试剂盒Exo-spin EX02, EX07-96
01、样本预处理-去除细胞和细胞碎片
a、300 x g 离心 10 min 以去除细胞，取上清。
b、16,000 x g 离心 30 min，以去除细胞碎片，取上清。
02、沉淀外泌体（若血清样本为100 µL则无需进行沉淀步骤）
a、以 1:2 的比例加入沉淀剂（例如，将 250 µL沉淀剂添加到 500 µL 血清样本中）。
b、颠倒离心管混匀，并在 4°C 孵育至少 5 min。
c、将混合液以 16,000 x g 离心 30 min，弃去上清液。
d、用 100 µL PBS 重悬含有外泌体的沉淀。
03、外泌体纯化
a、将100 µL外泌体重悬液加入纯化管柱（预处理后的）顶端。
b、让液体在重力作用下进入柱基质中，丢弃流出液。
c、将纯化管柱置入新的 1.5 mL 离心管以收获外泌体；加入180 μL PBS至纯化管柱顶端， 并通过重力洗脱。
d、将含有分离外泌体的样本收集管以 100 x g 短暂离心30 s，以便将所有液体收集到管底部，分离的外泌体即可用于下游应用。
▌Exo-spin 提取外泌体数据结果
Exo-spin提取的血清外泌体显示出优异的得率和纯度。通过纳米颗粒追踪分析（NTA）检测，每条曲线代表不同分离方法得到外泌体的3次技术重复测量的平均值。（PM=沉淀法，数据来源Martins, TS et al., 2018).
NTA和EXOCET分析对比Exo-spin与沉淀法提取的血清外泌体样本
▌Exo-spin外泌体提取试剂盒部分引用参考文献
• Lobos-González L, Bustos R, Campos A, et al (2020). Exosomes released upon mitochondrial ASncmtRNA knockdown reduce tumorigenic properties of malignant breast cancer cells. Scientific Reports 15;10(1):343.
• Bliss CM, Parsons AJ, Nachbagauer R, et al (2019). Targeting Antigen to the Surface of EVs Improves the In Vivo Immunogenicity of Human and Non-human Adenoviral Vaccines in Mice. Molecular Therapy - Methods & Clinical Development 24;16:108-125.
• Yang Y, Knight R, Stephens P, et al (2019). Three-dimensional culture of oral progenitor cells: Effects on small extracellular vesicles production and proliferative function. The Journal of Oral Pathology & Medicine 1.
• Corsello T, Kudlicki AS, Garofalo RP, et al (2019). Cigarette Smoke Condensate Exposure Changes RNA Content of Extracellular Vesicles Released from Small Airway Epithelial Cells. Cells 17;8(12).
▌FAQ
有没有操作视频可参考？
不同型号的Exo-spin试剂盒如何选择？
按照血清的起始样本量以及血清样本数量选择。
a、血清样本量为100 µL，可选择EX03(分别有8,24,50个SEC柱子的试剂盒)、EX07(Exo-spin 96,96个SEC柱子)
b、血清样本量为150 µL，可选择EX05(分别有5,20个SEC柱子的试剂盒)
c、血清样本量为500 µL以内，可选择EX02(分别有8,24,50个SEC柱子的试剂盒并含沉淀剂)、EX07(Exo-spin 96,96个SEC柱子，需另外搭配沉淀剂)
d、血清样本量为1 mL，可选择EX04(分别有5,20个SEC柱子的试剂盒，需另外搭配沉淀剂)
提取的外泌体怎么保存？
短期保存（一周内）置于4℃即可，长期保存请放置于-80℃。
如何确定提取得到的是外泌体？
根据国际细胞外囊泡协会发表的指导手册《MISEV 2018》，外泌体特征鉴定通过NTA测粒径分布、TEM电镜分析形态、WB检测标志蛋白三项来验证。NTA分析样品中外泌体的粒径分布和颗粒浓度，TEM电子显微镜来观察样品中外泌体的形态特征，WB检测外泌体标志蛋白。
如何从上清液中提取外泌体请查阅：【外泌体提取纯化】常见问题大合集 | 细胞上清
