逍鹏讲堂 ‖ 细胞培养中应重视的四个细节

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在重悬细胞时，过度吹打细胞，产生大量的气泡，易诱发细胞产生空泡，细胞受损并导致细胞的死亡，存活率也随之下降，这也是导致细胞复苏及传代存活率下降的原因之一。

通常用酚红作为pH指示剂，中性呈红色，偏酸颜色逐渐变黄，偏碱颜色逐渐加深。通常培养基都是红色，不同的培养基颜色也会有不同。

比如RPMI 1640颜色相对较浅，是因为酚红的浓度只有DMEM的四分之一，并非是pH值低。

无酚红的培养基呈无色。大多数细胞适宜pH值为7.2-7.4，偏离此范围对细胞将产生有害的影响。随着细胞的生长和代谢，pH值会下降液体呈现黄色。

胰酶的种类目前有胰蛋白酶、胰酶、重组胰酶等，不同的细胞对胰酶的敏感性不同，实验操作人员需根据实际情况选择合适的消化时间，消化不够，细胞成团；消化过度，细胞损伤，影响存活率。

比如干细胞消化时，大部分脱落，细胞变圆，需立即停止消化。

即使HCT15这种难消化的细胞，一般不超过5min，即可见细胞成片移动，就应该停止消化。

多数的哺乳类与禽类细胞在体外培养的适宜温度是37～38℃，不适宜的环境温度会影响细胞的生长。

在低温的环境中，细胞的代谢和活力下降。在37℃，酶的活性更高，细胞的生长是最快的。

但若被置于40℃数小时，则不仅不利于细胞生存、生长，甚至可导致其死亡。