α- 乳白蛋白除了在维持正常生长发育，提高血清色氨酸水平， 促进肠道健康等方面起到非常重要的作用外，还能促进体液免 疫和细胞免疫的作用，所以在婴幼儿配方奶粉中准确定量其含量变得尤为重要。关于 Alpha 乳白蛋白的测定方法主要有凝胶电泳法，反相高效液相色谱质谱法和凝胶色谱法三种，凝胶电泳法用时较长，上样量大且不同批次的染色剂和脱色剂很难保 证每次都有相同的染色结果，有重现性不好，定量检测差异大的问题。 RP 的方法需要样品酶解后质谱定性后进行定量分析，比较麻烦。尺寸排阻色谱法由于样品制备简单，分离效果良好，分析速度快而成为乳品中 α- 乳白蛋白分离的一个良好的选择。
本文采用 TCSIQ 77001-2020 乳制品中 α- 乳白蛋白 含量的测定的标准使用尺寸排阻液相色谱法分析 α- 乳白蛋白 和 β- 乳球蛋白的方法，可以准确定量普通奶粉和添加 α 乳 白蛋白奶粉中的 α- 乳白蛋白。方法简便可靠。
标准品制备：
准确称取 5mg α- 乳白蛋白标准品和 5mg β- 乳球蛋白标准品，置于 10mL 容量瓶中，用流动相溶解，并定容到刻度，作为储备液，分别取 5mL，2.5 mL，0.5mL, 0.25mL 的储备液用流动相稀释到 10 mL, 配置成浓度分别为 0.5 mg/ mL，0.25 mg/mL，0.125 mg/mL， 0.025 mg/mL 和0.0125 mg/mL 的标准品溶液，分别取 1.5 mL 配置好的标准工作液 加入 10μL 的巯基乙醇还原标准品蛋白，置于室温 2h 后再分析样品，该标准品应48h 内完成测定。
样品制备：
分别称取 1000.3 mg 的普通奶粉和 1000.6 mg α- 乳白蛋白添加的奶粉置于 10ml 的容量瓶中，加入 8mL 的流 动相溶解样品，超声 20 分钟，请确保样品温度不高于 30 度， 然后移到 10ml 容量瓶中，流动相定容至刻度 , 取 1.0 mL 溶 解后的样品至 10mL 容量瓶中，加流动相定容至 10mL。取 1.5mL 的溶液，加入 10μL 的 2- 巯基乙醇，旋紧瓶盖，剧烈 震荡 10s，置于室温下 2h 后再进行仪器分析，制备好的样品 在 48h 内测定完成。
色谱柱： MAbPac SEC-1X2(PN: 088460)
流动相： 5.66g 磷酸氢二钠 +0.35g 磷酸二氢钠 +0.29g 乙二胺四乙酸 +573g 盐酸胍用 50% 氢氧化钠调 节 pH 到 7.5
流速：0.5mL/min 检测器 UV280 nm
柱温： 室温
进样量： 50 μL
仪器： VANQUISH
采用Thermo Scientifc™ mAbPac SEC-1 7.8mmX300mm 色谱柱，可以快速的将奶粉中的 α- 乳白蛋白与 β- 乳球蛋 白分开，在本次试验中，检测得到样品一普通奶粉中每百克普 通奶粉中的 α- 乳白蛋白为 1.12 克，样品二每百克 α- 乳白 蛋白添加的奶粉 中 α- 乳白蛋白为 1.71 克。
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