由于甲状旁腺的自体荧光信号在垂直方向成像时最佳，因此在定位时必须轻微旋转摄像头。为了最大效率的自体荧光成像，该过程可分为几个阶段（P1-P6）。以下是甲状腺右侧叶切除的一个例子。
切开靠近甲状腺的中静脉，解剖甲状腺外侧的筋膜组织。然后将荧光摄像系统摄像头从外侧移动到内侧，以捕捉来自甲状旁腺的荧光信号(图2A，D)。我们主要寻找A型上甲状旁腺(图2B，C)和表面C1型(图2E，F)或背侧C2型下甲状旁腺。有时可以看到通过甲状胸腺韧带的C3型腺体的荧光，但腺体的轮廓通常不清晰。只有当甲状胸腺韧带很薄时才能确认。在此阶段，甲状旁腺的血供完整。
将甲状腺胸腺韧带与甲状腺的连接分离后，将甲状腺向上和向内拉。摄像头识别甲状腺和甲状胸腺韧带的背侧表面（图3A），在C2型腺体(通常有来自甲状腺、甲状腺下动脉或胸腺的血供)或C3型腺体(图3B、C)(大部分血供来自胸腺，部分可能与下动脉血供相结合。一般来说，没有来自甲状腺实质方向的血供)会产生明显的自体荧光并被定位。偶尔发现胸腺内C5型腺体(图3D，E)。在这个阶段，甲状旁腺的血供通常良好。
①切断甲状腺上动脉前支，提起甲状腺上极。使用荧光摄像系统从上方血管的方向识别上甲状旁腺，直到喉返神经进入喉部（图4A-C）。此时，甲状腺对甲状旁腺的血供被切断，仍可能保留上动脉后支或下动脉的血供。
②在可能的下甲状旁腺内侧，靠近甲状腺处切断部分下血管。将甲状腺下极进一步向上拉，暴露深层结构。从外侧到内侧使用荧光摄像系统检测甲状腺背侧（图4D），较深的C2型或出气管食管沟C4型腺体(图4E，F)被识别。此时甲状腺对下甲状旁腺的血供被切断，而下动脉的血供完好无损。通常，胸腺方向的血供对C3型腺体来说是足够的。如果能保留下动脉的血供，就能改善血液循环。
拉伸周围的组织，暴露气管食管沟。摄像头应放置在正上方，并寻找隐藏在气管食管沟深处或被其他组织覆盖的甲状旁腺(图5A)。新发现的上甲状旁腺A型或气管食管沟C4型（图5B，C)的血供可能已受损。
解剖喉返神经，暴露VI级组织和胸腺。将胸腺向上拉，朝向喉返神经的近端从头到尾成像（图5D）。在VI级的结缔组织下，可能会发现胸腺内C5型（图5E，F）或气管食管沟C4型。这里，胸腺内C5的血供充足，但在VI级发现的C4的血供可能已受损。
在标本送病理科冰冻切片或石蜡切片检查之前，将所有已切除的组织放在纱布上使用荧光摄像系统仔细检查，查看是否有无意中切除的甲状旁腺（图6）。
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