摘要：本试验旨在探究酵母培养物对蛋鸡生产性能、蛋品质、免疫功能和盲肠微生物的影响。选取288只65周龄的海兰褐蛋鸡，随机分为4个组，每组6个重复，每个重复12只鸡。对照组(NC组）饲喂基础饲粮，试验组分别在基础饲粮中添加0.3%(T1组）、0.5%(T2组）和0.8%(T3组）的酵母培养物。试验期8周。结果显示：1)与NC组相比，T1组和T2组的产蛋率显著提高(P<0.05)。2)与NC组相比，T1组的鸡蛋哈氏单位显著提高(P<0.05)。3)与NC组相比，T2组和T3组的血清免疫球蛋白G含量显著提高(P<0.05)。4)与NC组相比，在门水平上，T2组的盲肠脱硫杆菌门(Desulfobacterota)的相对丰度显著降低(P<0.05)；在属水平上，T2组的盲肠乳杆菌属(Lactobacillus)的相对丰度显著增加(P<0.05),而盲肠脱硫弧菌属(Desulfovibrio)的相对丰度显著降低(P<0.05)。综上所述，饲粮中添加酵母培养物可以提高蛋鸡产蛋率，改善蛋品质，增强免疫功能，改善盲肠微生物群落结构。本试验条件下，蛋鸡饲粮中酵母培养物的适宜添加水平为0.5%。
关键词：酵母培养物；生产性能；蛋品质；免疫球蛋白；盲肠微生物
动物饲料中长期使用抗生素，会使动物机体及肉、蛋、奶等畜禽产品中药物残留超标，进而对人类健康造成威胁。我国已禁止使用除中药外的所有促生长类药物饲料添加剂品种。因此，通过营养策略保持蛋鸡肠道健康、提高抗氧化能力和延缓衰老速度，从而提高蛋鸡的产蛋性能和蛋品质，延长蛋鸡寿命，是非常重要和有意义的。酵母是一种单细胞真菌，广泛用于饲料、食品和饮料行业。酵母培养物(yeastculture,YC)是活酵母在特定条件下发酵产生的微生态制剂，含有细胞代谢物、酵母细胞以及一些生物活性物质，包括β-葡聚糖、甘露聚糖、蛋白质、小肽、维生素、矿物质、酶和多种未知生长因子等,可以为肠道微生物提供丰富的营养，刺激有益菌的增殖,抑制有害菌的生长，维持肠道的菌群平衡。此外，β-葡聚糖和甘露聚糖通过刺激肠黏膜免疫，促进免疫反应，激活巨噬细胞，提高酸性磷酸酶活性，从而提高机体对多种疾病的抵抗力。有研究表明，酵母培养物能够提高机体免疫功能和抗氧化能力，并改善肠道健康,目前已广泛用于动物饲料中，对生产性能和动物健康具有有益影响。Zhang等研究发现，饲粮中添加3 g/kg酵母培养物可以通过提高肠道消化酶活性和肠道健康相关基因表达来改善产蛋后期蛋鸡的生产性能。Liu等研究发现，饲粮中添加2g/kg酵母培养物可以通过增加芽孢杆菌属(Bacillus)和乳杆菌属(Lacto-bacillus)的相对丰度来改善产蛋后期蛋鸡的抗氧化能力、免疫功能和营养物质的消化吸收。由此可见，酵母培养物有多种生物学功能（例如增加肠道有益菌的相对丰度），可以作为饲料添加剂在家禽上应用。因此，本试验在饲粮中添加不同水平的酵母培养物，旨在探究其对蛋鸡生产性能、蛋品质、免疫功能和盲肠微生物的影响，为酵母培养物在蛋鸡生产中的合理利用提供理论依据。
海兰褐蛋鸡购自东台市友国蛋禽专业合作社。酵母培养物为市售产品，简要生产工艺是通过对菌种活化扩培、对载体原料粗粉碎与灭菌熟化预处理，采用先好氧后厌氧的固体发酵工艺，并用气流瞬间烘干法烘干，以保留产品中益生菌等活性物质。有效成分包括益生菌及其代谢产物，如氨基酸、小肽、消化酶、酵母多糖、核苷酸、醇类、酯类和酚类等。其中，主要成分酵母多糖（葡聚糖、甘露聚糖）含量为1.5%,益生菌含量为108 CFU/g。
动物试验经江苏省家禽科学研究所实验动物福利与动物实验伦理委员会批准（编号20240313)。
试验选取65周龄海兰褐蛋鸡288只，随机分为4个组，每组6个重复，每个重复12只鸡。对照组(NC组）饲喂基础饲粮，试验组分别在基础饲粮中添加0.3%(T1组）、0.5%(T2组）和0.8%(T3组）的酵母培养物。试验期8周。
基础饲粮的配制参考NRC(1994)和《海兰褐蛋鸡饲养手册》，饲粮中粗蛋白质含量的测定参照GB/T6432—2018,钙含量的测定参照GB/T6436—2018。代谢能及有效磷、可消化氨基酸含量参照《中国饲料成分及营养价值表(2020年第31版）制订说明》计算。基础饲粮组成及营养水平见表1。
试验在江苏省家禽科学研究所实验基地进行，采用阶梯式3层笼养，每天08:00和14:00各饲喂1次，并对产蛋情况进行记录，鸡只自由采食和饮水，光照时间为每天16h,鸡舍内温度在21~25℃,保持通风，定期打扫鸡舍。
表1 基础饲粮组成及营养水平（风干基础）
1)维生素为每千克饲粮提供Vitamin premix provided the following per kilogram of the diet:VA 9 840 IU,VB1 1.5 mg,VB2 6.6 mg,VB6 2.4 mg,VB12 0.009 mg,VD3 3750 IU,VE 18 IU,VK3 1.8 mg,生物素 biotin 0.045 mg,烟酸 niacin 30 mg,叶酸 forlic acid 0.6 mg,泛酸钙 calcium pantothenate 10.5 mg。
2)矿物质预混料为每千克饲粮提供Mineral premix provided the following per kilogram of the diet:Zn 87 mg,Cu 12 mg,Fe 80mg,Mn 85 mg,I 0.3 mg,Se 0.3 mg。
3)代谢能、有效磷和可消化氨基酸为计算值，粗蛋白质和钙为实测值。ME,AP and digestible amino acids were calculated values,while CP and Ca were measured values.
1.4.1 生产性能
每天对产蛋数量、鸡蛋重量以及破蛋和畸形蛋的数量进行详细记录。每周对剩余饲料进行称重，并以重复为单位，计算平均日采食量、产蛋率、平均蛋重、产蛋量、料蛋比以及破畸率。
1.4.2 蛋品质
试验结束当天07:00,每个重复中随机选3枚鸡蛋，共计每组18枚，进行蛋品质测定。检测指标包括蛋壳强度(Egg Force Reader,以色列ORKA公司）、蛋壳厚度(NFN-380蛋壳厚度测定仪，日本FHK公司）、蛋白高度(EA-01 Egg Analyzer,以色列ORKA公司）、蛋黄颜色、蛋黄比例、蛋白比例、蛋壳比例及亮度、红度、黄度值，此外，计算哈氏单位和蛋形指数（电子数显卡尺，广陆数字测控股份有限公司）。
1.4.3 免疫功能
试验结束当天07:00,每个重复选取1只蛋鸡，翅静脉采集血液样品，室温静置2h,2060×8离心10 min,分离血清，采用酶联免疫吸附测定试剂盒（南京建成生物工程研究所），检测血清免疫球蛋白A(IgA)、免疫球蛋白M(IgM)和免疫球蛋白G(IgG)含量。
1.4.4 肠道微生物
试验结束当天07:00,NC组和T2组每个重复选取1只蛋鸡，屠宰后采集盲肠食糜于冻存管中，放入液氮中速冻，随后在-80℃保存，用于微生物的测定。样品16S rRNA测序工作由广州基迪奥公司完成。利用Illumina NovaSeq测序平台，对V3~V4高变区进行双端测序，以评估肠道微生物的丰富度、多样性和物种组成。
1.5 数据统计分析
使用Excel 2021对试验数据进行初步整理。利用SPSS 26.0软件，在95%的置信区间下剔除异常值，并对数据进行单因素方差分析(one-way ANOVA)和Duncan氏多重比较。结果以平均值和均值标准误(SEM)表示，P<0.05表示显著差异，0.05≤P<0.10表示有显著差异趋势。
由表2可知，与NC组相比，T1组和T2组的产蛋率显著提高(P<0.05)。饲粮中添加酵母培养物对其他生产性能指标无显著影响(P>0.05)。
表2 酵母培养物对蛋鸡生产性能的影响
同行数据肩标不同小写字母表示差异显著(P<0.05),相同或无字母表示差异不显著(P>0.05)。下表同。
由表3可知，与NC组相比，T1组的鸡蛋哈氏单位显著提高(P<0.05)。饲粮中添加酵母培养物具有提高鸡蛋蛋白高度的趋势(P=0.071),对其他蛋品质指标无显著影响(P>0.05)。
表3 酵母培养物对蛋鸡蛋品质的影响
由表4可知，与NC组相比，T2组和T3组的血清IgG含量显著提高(P<0.05)。饲粮中添加酵母培养物对血清IgA和IgM含量无显著影响(P>0.05)。
表4 酵母培养物对蛋鸡血清免疫球蛋白含量的影响
2.4.1 盲肠微生物测序质量分析和操作分类单元(OTU)分析
由图1-A可知，随着检测样本测序量的增加，OTU数量及OTU相对丰度也不断增加且趋于平缓，表明测序数量、测序深度已达到后续分析要求。由图1-B可知，97%相似度下进行聚类，所有的序列共聚类成 1 156个OTU,其中，NC组有877个OTU,267个特有OTU;T2组有889个OTU,279个特有OTU;NC组和T2组之间共有610个OTU。
2.4.2 酵母培养物对蛋鸡盲肠微生物Alpha多样性的影响
由表5可知，NC组和T2组之间蛋鸡盲肠微生物Chao1指数、Ace指数、Shannon指数和Simp-son指数均无显著差异(P>0.05),表明饲粮中添加酵母培养物对蛋鸡盲肠微生物的丰富度和多样性无显著影响。
表5 酵母培养物对蛋鸡盲肠微生物Alpha多样性的影响
2.4.3 酵母培养物对蛋鸡盲肠微生物Beta多样性的影响
本试验采用主坐标分析(principalcoordinatea nalysis,PCoA)方法，通过Unweighted_Unifrac距离来比较蛋鸡盲肠微生物的相似性。由图2可知，PCoA结果显示，NC组和T2组之间存在显著的分离距离，组内聚类更明显，表明2组间的菌群组成存在显著差异(P<0.05)。
图2 酵母培养物对蛋鸡盲肠微生物Beta多样性的影响
2.4.4 酵母培养物对蛋鸡盲肠微生物组成的影响
由图3可知，在门水平上，NC组和T2组盲肠菌群中优势菌门有厚壁菌门(Firmicute)、拟杆菌门(Bacteroidetes)和脱硫杆菌门(Desulfobactero-ta),在NC组的相对丰度分别为42.23%、43.61%和5.40%,在T2组的相对丰度分别为45.32%、42.22%和4.26%。在属水平上，NC组和T2组盲肠菌群中优势菌属有拟杆菌属(Bacteroides)、Lac-tobacillus、粪杆菌属(Faecalibacterium)、考拉杆菌(Phascolarctobacterium)、理研菌科RC9肠道群(Rikenellaceae_RC9_gut_group)、巨单胞菌属(Me-gamonas)、脱硫弧菌属(Desulfovibrio)和扭链瘤胃球菌属(Ruminococcus_torques_group),在NC组的相对丰度分别为19.42%、4.31%、6.80%、5.40%、4.30%、3.62%、3.35%和2.19%,在T2组的相对丰度分别为18.84%、8.03%、4.67%、4.79%、4.06%、3.99%、2.37%和2.32%。
由表6可知，在门水平上，与NC组相比，T2组的盲肠Desulfobacterota的相对丰度显著降低(P<0.05)。在属水平上，与NC组相比，T2组的盲肠Lactobacillus的相对丰度显著增加(P<0.05),而盲肠Desulfovibrio的相对丰度显著降低(P<0.05)。
2.4.5 酵母培养物对蛋鸡盲肠微生物的线性判别分析效应大小(LEfSe)分析
为了进一步评估酵母培养物对蛋鸡盲肠微生物组成的影响，通过LEfSe分析来鉴定组间在相对丰度上具有显著差异的物种（图4)。结果显示，在线性判别分析(LDA)值＞3和P<0.05的条件下，NC组的优势菌有浮霉菌门(Planctomyce-tes)、Pirellulales、Pirellulaceae、UBA1819、脱硫弧菌科(Desulfovibrionaceae)、脱硫弧菌目(Desulfo-vibrionales)、Desulfobacterota、脱硫球菌纲(Desul-fovibrionia)、脱硫弧菌属(Desulfovibrio)和Harry-flintia;T2组的优势菌有芽孢杆菌纲(Bacilli)、乳杆菌目(Lactobacillales)、乳杆菌科(Lactobacillace-ae)、Lactobacillus、梭状芽孢杆菌纲_UCG_014(Clostridia_UCG_014)、嗜冷菌属(Psychrobacter)和史雷克氏菌属(Slackia)。
酵母培养物是一种功能性饲料添加剂，可以作为抗生素的替代品提高畜禽生产性能。Luo等在蛋鸡饲粮中添加40 g/kg复合酵母培养物，发现产蛋率有所提高，推测可能与酵母培养物对产蛋后期蛋鸡肠道菌群组成的调节作用有关。Hashim等在蛋鸡饲粮中分别添加 250 和
500 mg/kg酵母细胞壁，提高了21~28周龄蛋鸡的平均蛋重；此外，在29~36周龄添加250 mg/kg酵母细胞壁蛋鸡的平均蛋重显著高于添加500 mg/kg酵母细胞壁。Qiu等在饲粮中添加
2 g/kg酵母培养物，显著提高了蛋鸡的产蛋率，同时降低了料蛋比和破畸率。本试验结果表明，饲粮中添加酵母培养物对平均蛋重和平均日采食量无显著影响；然而，添加0.3%和0.5%的酵母培养物显著提高了蛋鸡的产蛋率。这与Liu等的研究结果一致，其在蛋鸡饲粮中添加5、10、20、40 g/kg的生姜酵母培养物可以提高蛋鸡的产蛋率，且提高了粗蛋白质的表观消化率，表明酵母培养物可以通过提高营养物质消化率进而提高蛋鸡的生产性能。
A：门水平相对丰度relative abundance at phylum level;B：属水平相对丰度relative abundance at genus level。
图3 酵母培养物对蛋鸡盲肠微生物组成的影响
鸡蛋作为人类重要的蛋白质来源，可以通过多个指标评估其品质，比如鸡蛋重量、蛋壳强度和厚度、蛋黄比例、蛋白高度以及哈氏单位等。其中，蛋黄比例越高，表明鸡蛋质量越好，而哈氏单位则是衡量蛋白质量和新鲜度的重要国际标准，反映了蛋白的稠度和稳定性。研究表明，饲粮中添加酵母培养物能够提高鸡蛋的蛋壳强度、蛋黄颜色、蛋白高度和哈氏单位,这可能是因为酵母培养物中的营养成分和代谢产物促进了蛋鸡体内钙和其他营养物质的吸收和利用，从而改善了蛋品质。Özsoy等研究发现，饲粮中添加0.2%酵母培养物提高了鸡蛋的哈氏单位。Zhong等研究也发现，饲粮中添加0.3%酵母培养物可提高鸡蛋的蛋白高度和哈氏单位，进一步证实了酵母培养物对蛋白质量和稳定性的积极影响。在本试验中，饲粮中添加0.3%酵母培养物同样提高了鸡蛋的哈氏单位，表明酵母培养物可以有效改善蛋品质。此外，相关研究指出，酵母培养物富含小肽、氨基酸、维生素以及多种促进代谢的营养成分，这些成分能够增强蛋鸡的消化能力，促进营养物质的吸收和沉积,这些机制可能共同作用，提高了蛋品质。
免疫球蛋白(IgA、IgG和IgM)含量是评估动物先天免疫状态的关键指标。其中，IgG是血清中免疫球蛋白的主要成分，IgA与黏膜免疫密切相关，而IgM与急性感染的早期反应相关。酵母培养物含有β-葡聚糖、几丁质、核酸和低聚糖。酵母细胞壁中的甘露寡糖和β-葡聚糖已被证实具有增强免疫调节功能。β-葡聚糖通过与巨噬细胞、中性粒细胞、树突状细胞和自然杀伤细胞表面的补体受体3(CR3)或Toll样受体(TLRs)等结合，诱导B细胞产生IgG,从而刺激机体产生免疫应答。Zhen等在蛋鸡饲粮中添加50、100和200 mg/kg的β-葡聚糖，增强了蛋鸡的细胞免疫和体液免疫功能，且不会干扰免疫稳态。此外，相关研究发现，饲粮中添加酵母细胞壁多糖提高了蛋鸡血清IgM含量，表明饲粮中添加酵母细胞壁多糖可以提高蛋鸡的体液免疫功能。赵桂玲等研究发现，饲粮中添加1、2 g/kg酵母培养物提高了黄羽肉鸡血清IgA和免疫球蛋白Y(IgY)含量。本试验结果与前人研究一致，在蛋鸡饲粮中添加0.5%和0.8%酵母培养物能够显著提高血清IgG含量，表明酵母培养物可以提高蛋鸡的免疫功能。
肠道菌群的平衡对动物健康至关重要。在正常情况下，肠道菌群保持动态平衡，菌群相对丰度保持稳定。肠道菌群在维持肠黏膜的完整性方面发挥着重要作用，外部刺激会导致肠道菌群失衡。在饲粮中添加有益菌可以改善肠道完整性，从而提高营养物质的生物利用度和吸收。有研究指出，产蛋高峰期的蛋鸡盲肠中，在门水平上 Bacte-roidetes(47.5%~62.0%)和 Firmicute(30.8%~60.4%)占主导地位；在属水平上Bacteroides(11.1%~32.5%)、毛螺菌属(Lachnospira)(5.0%~8.0%)和Lactobacillus(2.0%~10.0%)占主导地位。Qiu等在饲粮中添加1.0g/kg酵母培养物，在门水平上增加了放线菌门(Acti-nobacteria)的相对丰度，减少了变形菌门(Pro-teobacteria)的相对丰度，在属水平上增加了Bacte-roides和Lactobacillus的相对丰度，减少了梭状芽孢杆菌属(Clostridium)、Faecalibacterium和瘤胃球菌属(Ruminococcus)等的相对丰度。同时，先前有研究表明，在饲粮中添加酵母培养物增加了蛋鸡盲肠Bacteroidetes的相对丰度，减少了 Firmicute和Proteobacteria的相对丰度。有研究表明，盲肠微生物群落的调节可能会影响蛋鸡的生产性能和蛋品质。本试验结果显示，饲粮中添加0.5%酵母培养物，蛋鸡盲肠微生物的组成与NC组存在差异，且在门水平上降低了盲肠Desul-fobacterota的相对丰度；在属水平上增加了盲肠Lactobacillus的相对丰度，降低了盲肠Desulfo-vibrio的相对丰度。这表明酵母培养物可能会通过促进益生菌的生长并抑制有害菌的生长，调节肠道菌群的组成，从而提高蛋鸡的生产性能和蛋品质。
饲粮中添加酵母培养物可以提高蛋鸡产蛋率、鸡蛋的哈氏单位和血清IgG含量，并改善盲肠微生物群落结构。本试验条件下，推荐蛋鸡饲粮中酵母培养物添加水平为0.5%。
本文来源自：动物营养学报 ２０２５，３７（９） ：５８７７⁃５８８５
作者：王 妍 肖蕴祺 郭长征 陈静龙 黎观红 施寿荣
（１．江苏省家禽科学研究所，扬州 ２２５１２５；２．江西农业大学动物科学技术学院，南昌 ３３００４５）
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