逍鹏讲堂 ‖ 如何养好RAW 264.7细胞

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每一种细胞都有自己的“脾气”，RAW 264.7更是如此，要想养好它，首先我们得充分了解它，比如生长特点、细胞形态、培养体系等，在这基础上，养好它自然也是“水到渠成”。

英文名称：RAW 264.7

中文名称：小鼠单核巨噬细胞白血病细胞

种属：鼠源

组织来源：Abelson鼠科白血病病毒诱导的肿瘤；单核细胞；巨噬细胞

生长特性：贴壁生长（胰酶会刺激分化）

细胞形态：不规则性（圆形和梭形为主）

传代比例：1:2 - 1:3

换液频率：2-3次/周

培养体系：DMEM高糖（货号：C3113-0500）+10% 特级胎牛血清（货号：C04001-500）+1% 双抗（货号：C3421-0100）

培养条件：5% CO₂；37℃

RAW264.7细胞具有强吞噬能力，细胞在吞噬抗原后释放趋化因子，促使细胞分化出伪足，因此造成细胞难消化。

RAW 264.7在传代过程中，不需要使用酶进行消化，酶消化会加速细胞的分化。现在比较常见的是吹打传代，此方法易于操作，也能很好地控制细胞的分化。

< 传代的步骤 >

• 第一步：

  用移液管将培养基中的培养液吸干净。

  
  

• 第二步：

  用 PBS 将细胞层清洗1至2遍。

  
  

• 第三步：

  用移液管吸取新鲜的培养基轻轻将细胞吹打下来，并将细胞吹打成单细胞悬液，注意吹打的力度，避免过重或者过轻。

  
  

• 第四步：

  将吹打好的单细胞悬液进行分装接种。

1. 根据我们的经验，RAW264.7三天就可能分化，吹下的难度也大大增加，通过及时传代将RAW 264.7的分化比例控制在合理的范围内。

2. 该细胞不建议使用胰酶消化，胰酶会刺激分化，超过3天不传代细胞容易分化。培养时，存在少量分化细胞，属于正常现象。

3. 推荐使用吹打传代，可以有效控制细胞分化。

4. 当细胞的密度达到80%-90%的时候，最容易吹下；密度较低，不太好吹下来。

5. 接种的密度需要控制好，推荐进行高比例的传代。

6. 推荐使用高质量的胎牛血清，血清的质量差异会导致贴壁能力的变化。

7. 随着培养时间的增加，细胞呈现圆形并以叠加的形式生长。当细胞的密度增加到一个“临界点”的时候，会有细胞散落到培养基中，此时悬浮和贴壁的细胞会同时出现在视野中  。

8. 由于堆积生长，有些细胞脱落漂浮，在传代时应收集起来，离心后细胞沉淀可以继续培养。              

9. 切勿强制吹下所有的细胞，贴壁较牢或已分化的细胞可丢弃，就只需接种较容易吹打下来的未分化的细胞即可。

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