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希尔博士讲堂 | “无忧”收获高浓度细胞产物

希尔博士讲堂 | “无忧”收获高浓度细胞产物 云南泽浩
2022-06-22
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导读:图1 FiberCell系统结构与功能的说明FiberCell 工作特点纤维内外空间模拟体内微环境状态20


图1 FiberCell系统结构与功能的说明




FiberCell 工作特点

  • 纤维内外空间模拟体内微环境状态

  • 20 mL中型培养筒,可培养108-109细胞量

  • 培养筒中不同截留分子量的纤维可富集高浓度的细胞产物

  • 降低细胞对血清的要求,易于适应无血清培养

  • 可长期培养细胞与收获细胞产物(长达数月)

  • 欧盟CE认证



FiberCell 应用方向

3D细胞培养

在许多方面,FiberCell系统被认为是原始的3D细胞培养系统。培养环境的不同会影响细胞的生长与行为表达,而细胞在FiberCell系统内长时间如组织样培养,更像体内的细胞培养方式。选择合适的纤维截留分子量,允许细胞间特定大小的蛋白进行信息交流,使用FiberCell系统再现体内微环境可用于构建细胞共培养模型。


FiberCell系统应用于3D细胞培养的优势
  • 减少细胞凋亡

  • 长期培养的一致性

  • 更接近体内的生长环境改善细胞的功能

  • 更适用于无血清、无蛋白和化学成分确定的培养基


图2 FiberCell系统中3D生长的心脏细胞球状体



3D共培养模型的应用案例
  • 内皮细胞与血管平滑肌细胞、神经胶质细胞的共培养(血脑屏障模型)

  • 癌症转移模型(内皮细胞培养)

  • 骨髓模型

  • 胎盘共培养模型

  • 隐孢子虫与胃上皮共培养模型

  • 抗病毒药物动力学

外泌体富集

外泌体的功能正在被快速挖掘与利用,如何在实验室条件下获得高浓度的细胞产物,成为外泌体深入研究的第一道关卡。常规2D细胞培养可收获的细胞上清体积大,颗粒浓度低,后续纯化成本高。FiberCell系统拥有高密度细胞培养收获高浓度细胞产物的独特优势,为细胞生长提供了足够的表面积,20 kD的截留分子量可以将细胞90%以上分泌的颗粒物富集在纤维外空间,可持续收获时间长。

图3 FiberCell系统应用于UC-MSC的外泌体富集研究-葡萄糖消耗监测(左图) FiberCell系统收获外泌体与2D培养的特征比较(右图)


FiberCell系统应用于外泌体富集的优势
  • 中型培养筒可接种细胞量108-109

  • 收获20 mL/次,未纯化的颗粒浓度约109-1010 particles/mL

  • 可持续收获2-3个月

  • 每日维持操作简单,节省时间与成本


FiberCell系统适用的细胞/细菌外泌体富集案例
  • MSC(脐带、脂肪、骨髓、牙髓、羊膜等来源)

  • HEK293/293T细胞

  • 肿瘤相关细胞

  • 结核分枝杆菌等

单克隆抗体与重组蛋白表达

实验室内通过动物模型收获小鼠腹水再纯化获取单克隆抗体,生产规模小,周期长,动物个体的差异也会导致蛋白的差异。如何在有限空间与时间内达到小规模或商业化地生产单克隆抗体/重组蛋白来满足科学研究?恰好FiberCell系统可在培养箱内实现小规模持续生产,大大缩短生产周期与纯化成本。另外搭配无蛋白、化学合成的血清替代物CDM-HD,提高表达蛋白的纯度与一致性。

图4 SDS-PAGE分析上清中重组蛋白M5114的表达情况


FiberCell系统应用于单克隆抗体与重组蛋白生产的优势
  • 减少TGF-β因子对杂交瘤细胞的抑制作用

  • 高表面积的聚砜纤维促进营养物质与代谢废物的交换

  • 血清替代物CDM-HD减少脂质、内毒素等物质的产生

  • 可让结构复杂的蛋白正确折叠与表达

  • 不同大小的截留分子量可以灵活运用于各类蛋白的收获


FiberCell 参数说明

图5 FiberCell系统置于培养箱内的实物图




设备规格:

42 cm*20 cm*30 cm(L*W*H),重量5 kg

设备清单:

FiberCell专用双向泵 1个
FiberCell专用中空纤维细胞培养筒(一次性) 2个
FiberCell专用储液瓶瓶盖 2个
储液瓶 2个
CHM-HD血清替代物(可选) 1瓶
一次性注射器(螺纹口,20 mL) 100支
血糖仪(人用) 1台




*注:

1、常规实验室100 L容积大小的恒温培养箱可放置。

2、扁平电源线可直接通过培养箱玻璃门,不会影响培养箱的温度与气体浓度。






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参考文献

  • http://www.xpbiomed.com/fibercellzkxwxt

  • Cao J, Wang B, Tang T, et al. Three-dimensional culture of MSCs produces exosomes with improved yield and enhanced therapeutic efficacy for cisplatin-induced acute kidney injury. Stem Cell Res Ther. 2020 May 27;11(1):206.














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