缺氧小室-细胞低氧培养操作及使用方法

低氧培养是最常用的细胞低氧模型建立方法之一。

间充质干细胞的研究、视网膜细胞的研究、心肌细胞研究等等都可能会需要在体外进行低氧环境下的细胞培养。STEMCELL的缺氧小室（Hypoxia Incubator Chamber，产品号 # 27310）可用于模拟生物体内的低氧状态，便于干细胞、神经系统、心血管系统、代谢等相关病理、生理机制及缺氧疾病的研究。

缺氧小室是什么？

缺氧小室是一个独立的密封室，适合放置在现有实验室的细胞培养箱内使用。整个装置均采用优质聚碳酸酯模制而成，长期使用不会破裂或起雾。

小室分别可容纳以下数量规格的孔板或培养瓶：

84 x 35 mm dish
27 x 60 mm dish
12 x 100 mm dish
12 x 96-well plates
18 x 25 cm² flasks

缺氧小室包含以下配件（见图1）：

一个透明顶盖（聚碳酸酯）
一个透明底盘（聚碳酸酯）
橙红色O形圈和两根管夹
三个托盘（聚碳酸酯）
一个蓝色环形手柄夹

缺氧小室配件展示图

图1 缺氧小室正面展示图（上图红色箭头所示1-2是带管夹的管子，任选其中一根来连接流量计，另一根管则是充气时保持打开，充完气体两个管子均进行关闭）

缺氧小室需要与单向流量计配合使用。单向流量计（产品号#27311）与缺氧小室连接的管子红色部分为泄压阀（图2）。安装时，红色泄压阀将流量计的顶端口（出气管）连接到缺氧小室，底端管子已附带白色过滤器（入气管），用来连接气瓶接口。

图2 流量计背面展示图

图3 流量计正面展示图

此前，我们收到关于缺氧小室的问询，有很多小伙伴对我们缺氧小室的安装和使用存在疑问。本文给大家整理了使用缺氧小室的常见问题，还有中文字幕的指导视频。

你问我答

Q1:

三个托盘都要使用吗？

缺氧小室里共有三个托盘，如果仅有少量培养皿或者培养瓶，可以选择使用一个托盘。

Q2:

流量计上的泄压阀需要手动操作吗？过滤器多久更换一次？

流量计的红色部分是一个泄压阀（图2）。红色的泄压阀不需要任何干预。如果流量计和缺氧小室之间的压力过大，泄压阀将自动打开（压力敏感装置），防止缺氧小室受损。流量计自带一个1微米滤径的过滤器；一般来说过滤器并不需要更换，但如果需要更换，可以联系我们单独订购。

Q3:

缺氧小室第一次充气如何操作，充气多久？

首先，缺氧小室的安装和充气，您可以先观看操作视频：尽量使用单向流量计，以控制向小室充气的流速。调节流量计和气瓶上的调节器，使气体流速为20-25 L/min（最大流速为25 L/min）。将流量计的出气管与缺氧小室连接。所以首次充气时，要将两边夹子都打开，进行充气，保持 20 L/min流速，充气4-5分钟后，将流量计与缺氧小室分开，闭合入气管和出气管上的塑料夹（白色）来密封缺氧小室，这时候再把小室放回培养箱即可。

Q4:

如何进行100%的气体置换？

如果要完成小室100%的气体置换，需要缺氧小室内体积的10-15倍的气体量，以20 L/min流速充气 4-5分钟，气体总的周转量刚好约为缺氧小室内体积的15倍（缺氧小室内体积约为6.5升）。

Q5:

如何判断小室的密封性？

正常给小室充气后，在室温下（15 - 25℃）密封缺氧小室，然后置于37℃培养箱中1小时。最后把缺氧小室取出，将泵管(Tygon tubing)靠近耳朵，打开管夹（Tubing Clamp）倾听气体泄露的声音，如果听到的是“噗”的一声而非连续不断的漏气声，则说明密封很好。如果小室密封不好，可能需要调整环形夹钳（Ring Clamp）。松开环形夹钳的锁紧螺母，顺时针旋转螺栓拧紧，调整完毕后拧紧螺母即可。

Q6:

小室中的氧气含量是多少？

目前很难准确监测缺氧小室里面的氧气含量，原因是缺少合适的氧气测量装置。假设没有泄漏，理论上氧气水平是恒定的。

Q7:

小室可以密封多久？

缺氧小室一旦密封，我们验证过2-3周内，不会有气体泄漏或与外部环境有气体交换。由于培养瓶和培养基中气体的扩散或交换，气体成分可能会发生非常微小的变化。因此对于放了很多细胞培养皿的小室，我们建议在孵育一小时后再次充气，以除去残留在培养皿中的气体。

Q8:

如何对缺氧小室进行清洁？

可以在超净台中用70%的酒精擦拭缺氧小室，不可高压灭菌，擦拭后放到培养箱中即可。另外，该产品不建议紫外灭菌，因为O-ring是橡胶或乳胶制品，长期紫外照射会加速老化。

注意：缺氧小室为了保持湿度，底层可以加一个大皿放无菌水，水是灭菌水或者是无菌PBS都可以。

Q9:

小室的使用是否存在安全隐患？