做ChIP实验染色质制备的时候总是遇到染色质片段化不好、重复性不好、IP后得到的量过少?看看下面新鲜出炉的最近我们基因技术小伙伴们帮助用户优化的实例。
用户实例分享
最近有用户找到我们基因技术小伙伴,反映他们超声的染色质片段总是有超不断的染色质,并且重复性也不好。经过沟通和分析,我们技术小伙伴上门服务,带上我们的试剂盒陪着用户一起做,一次摸索即帮助用户确定了超声条件,打断梯度明显,WB 结果验证良好,后续用户按照我们的实验SOP操作也获得了良好的重复性。
实例一
优化前
样本为Hela细胞,细胞数量2 X10^7,使用T家ChIP试剂盒,琼脂糖胶浓度1.2%。超声无明显打断梯度,同时有大片段残留及超声过碎的片段 。
优化后
相同样本使用Covaris ChIP试剂盒及其流程优化后,超声有明显打断梯度,4-8min 即使大部分片段在150-750bp。取各时间点超声样本进行WB,WB条带显示,2-8min抗原表位几乎无损伤,超声8min蛋白丰度最高。
实例二
下面两图也是基因小伙伴上门服务帮助用户摸索的染色质超声片段化电泳和WB 结果,是用Covaris truChIP超声试剂盒+Covaris 超声进行第一次ChIP实验超声时间梯度摸索。可以看到明显的打断梯度,超声4-8min即可达到绝大部分片段在150-750bp,目的蛋白WB结果显示,超声4min组条带浓度最高。建议选择4min超声条件。
超声打断染色质胶图
各时间点超声样本WB结果图
可见使用Covaris超声+Covaris truChIP超声优化试剂盒,仅需1-2次时间梯度摸索即可得到稳定的超声条件,易优化可重复,低SDS配方,节约3倍抗体花费,低温超声保护抗原表位,提高IP效率!
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