提升NanoDrop样品检测重复性只需要做好这几步- 大数跨境

基因快讯

2023-05-31

导读：在生物学实验中，准确可重复的测量出样本真实浓度是进行下游实验的必要前提。如果您发现使用NanoDrop系列分光光度计获得的结果不准确或不可重现时，则需要重点考虑样品不均匀或检测液柱不完整（基座测量）

在生物学实验中，准确可重复的测量出样本真实浓度是进行下游实验的必要前提。如果您发现使用NanoDrop系列分光光度计获得的结果不准确或不可重现时，则需要重点考虑样品不均匀或检测液柱不完整（基座测量）等问题。下面就介绍几种提高样品检测重复性的方法:

一、确保样品溶液均匀

由于使用NanoDrop分光光度计进行基座测量所需的样品体积很小，因此需要确保被测样品的均匀性。实际经验表明，含有大分子（如基因组或λDNA）的样品特别容易受到这种现象的影响。如果与正在使用的protocol兼容的情况下，可以在测量前将DNA样本加热至 63°C 并轻轻涡旋可确保核酸充分溶解。

二、确认样本浓度

通常在检测限或接近检测限的情况下测量样品可能会导致重复组之间的CV值偏高。NanoDrop One dsDNA检测范围为2-27500ng/μl,BSA检测范围为0.06-820mg/ml,更多的样品检测范围可参考NanoDrop使用手册。

三、确认空白溶液

为了尽量减少空白溶液的吸光度影响，对于大多数应用，使用用于再悬浮目标分析物的相同缓冲溶液进行空白检测。空白检测溶液的 pH 值和离子强度应类似于分析物溶液。检测每组样品之前，进行一次新的空白检测。除非样品溶解在不同的缓冲溶液中，否则不需要在检测每个样品之前进行仪器空白检测。

四、使用1.5-2μl样本量进行基座测量

在样本测量过程中液柱没有完全形成，可能会出现错误的结果。如样品量足够的情况下，建议使用1.5-2μl的样品量以确保形成色谱柱（浓度计算与体积无关）。在将样品转移到基座上后，请立即放下检测臂进行分光光度测量，防止样品蒸发或污染。

五、在启动软件模块之前确保测量基座表面纯净

被污染的基座可能导致错误的吸光度读数（甚至是负值）和信号饱和。最好先用去离子水清洁基座表面，以去除可能存在的污染物，每次测量后都需要使用无尘纸仔细擦拭检测基座。

六、检测基座修复

已知含有表面活性剂的蛋白质和溶液会“破坏”测量基座表面涂层，可能会影响检测液柱的形成。当基座表面涂层受损时，可使用仪器修复试剂盒PR-1对基座进行快速修复,恢复其疏水状态。

七、使用性能验证试剂盒PV-1确认仪器精度

定期的性能验证是保持光学仪器准确性的可靠方法。PV-1是一种浓缩的重铬酸钾标准品，可从基因有限公司购买。建议每半年使用一次PV-1，运行性能验证检查程序，以保证仪器在稳定准确的检测范围内运行。

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