Cyto-Cellect®PLUS提供增强的人IgG检测能力！

Cyto-Cellect®PLUS是适配于Cyto-Mine®的人IgG检测试剂盒，可检测皮滴包裹细胞中分泌的具有κ和λ轻链的全分子人IgG。其检测原理如图1所示：一对定制的IgG特异性AOF荧光探针被包裹在每个皮滴中。从包裹细胞中分泌的IgG被检测探针对识别，形成诱导荧光信号变化的三元FRET复合物。Cyto-Cellect®PLUS结合Cyto-Mine®可根据CHO细胞的生产率进行富集和单细胞分配。

图1. Cyto-Cellect®PLUS IgG分泌细胞检测示意图。

该试剂盒的具体表现如何？让我们一起来看看~

通过ELISA测定Cyto-Cellect®PLUS供体和受体探针与人IgGκ和IgGλ的结合。供体（图2A）和受体（图2B）探针均以高亲和力结合IgGκ和λ分子。IgG亚类与供体和受体的结合差异明显，与其他IgG1λ和IgG2λ相比，IgG3λ和IgG4λ与供体和受体的结合差异至少为2倍（EC50值）。

图2.使用ELISA测定Cyto-Cellect®PLUS探针与人IgG分子的结合。

使用市售IgG或细胞培养物上清液中分泌的IgG测定Cyto-Cellect®PLUS检测人IgG分子的能力。CytoCellect®PLUS显示出对商业IgG 1 -4κ的剂量依赖性应答（图3A）。图3 B和C显示使用Cyto-Cellect®PLUS对IgG1λ和3λ的FRET应答，尽管来自不同商业来源的IgG1λ显示出良好的检测效果，但在较低检测浓度下无法检出IgG3λ。而使用Cyto-Cellect®试剂盒显示，尽管IgG 4κ可被检测到，但IgG1λ不能被该试剂盒检测到（图3C）。

图3.使用市售IgG或细胞培养物上清液中分泌的IgG测定Cyto-Cellect®PLUS的FRET响应。（A和B）在Cyto-Cellect®PLUS探针的存在下滴定商业来源的抗体。（C）在Cyto-Cellect®或Cyto-Cellect®PLUS探针的存在下滴定含有IgG 1λ的上清液。作为对照，滴定市售IgG 4κ，并通过两种试剂盒检测。

将分泌IgG 1λ或IgG 4κ的CHO细胞和Cyto-Cellect®PLUS FRET探针包裹在皮滴中，37°C孵育，以获得抗体分泌的最佳条件。分泌的抗体在皮滴内积累，通过Cyto-Cellect®PLUS FRET探针捕获并检测。在Cyto-Mine®中检测分泌抗体的细胞，并分配到组织培养板中。

图4A显示了在细胞与Cyto-Cellect®PLUS探针孵育2小时后，分泌IgG 4κ的CHO细胞的FRET响应。Cyto-Cellect®PLUS也用于分泌IgG 1λ的CHO细胞的检测、分选和分配（图4 B-C）。图4B显示了细胞的富集，然后在Cyto-Mine®中利用Cyto-Cellect®PLUS进行单细胞分配（图4C）。

图4. Cyto-Cellect®PLUS用于在Cyto-Mine®中富集和单细胞分配分泌IgG的CHO细胞。

为了确定Cyto-Cellect®PLUS探针与除人IgG之外的免疫球蛋白同种型的交叉反应性，在Cyto-Cellect®PLUS探针存在下滴定商业来源的人IgM、IgA和小鼠IgG。并使用酶标仪检测FRET反应。IgG 1 λ用作对照。图5显示Cyto-Cellect® PLUS在测试浓度下与人IgA或小鼠IgG无交叉反应性。然而，在高浓度下观察到人IgM的最小检测。

图5. Cyto-Cellect®PLUS与人和小鼠免疫球蛋白的交叉反应性。