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来自PacBio的样品
质控
官方推荐
01
RNA Sizing Characterization and Quantification
RNA定性/定量要求
推荐Aglient 2100
质控要求：
■ RIN ≥ 8
RIN值是评估RNA 完整性的指标，分值1-10
10 代表完整性最好；1 代表降解最严重
■ RNA 总量最少需要300ng
仪器优势：
■ 上样量低， >5ng 样品
RNA 完整性 表现
02
RNA Purity Determination
RNA 纯度
推荐Thermo NanoDrop One
质控要求
■ OD260/280 1.8-2.0
■ OD260/230 2.0-2.5
仪器优势：
■ 上样量低；1-2ul 样品
■ 检测速度快
NanoDrop 判断标准
260/280 低 可能蛋白/苯酚污染
260/230 低
碳水化合物残留（通常是植物的问题）
核酸提取物中的残留酚
残留胍（常用于基于色谱柱的试剂盒）
糖原残留
Option ：RNA Quantification
RNA 定量备选方案
推荐Life Qubit 4
■ 荧光法检测RNA量
配合RNA BR kit 使用
建议：
最好使用沉淀法提取RNA 可以减少基因组DNA 污染。
DNase I处理可去除DNA污染，建议评估其破坏RNA完整性的风险。
例如，使用 RNase free 的DNase， PacBio建议使用市售的试剂盒（不涉及DNAase I酶热失活方法）这样可以保证RNA 不易被降解。
在大多数情况下，低水平的残留基因组DNA污染对于Iso-Seq应用并不成问题。这是因为在反转录过程中，将oligo-dT引物与5'模板转换寡核苷酸（TSO）结合使用，扩增出全长cDNA。
总结
RNA质控要求
希望对各位老师有所帮助，敬请期待一下篇哦！
PacBio HiFi reads
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基因有限公司作为PacBio公司在中国区的独家代理商，自2011年将PacBio第三代单分子实时测序技术引入国内以来，一直为国内用户提供专业的三代测序系统的安装培训，技术支持与售后维护工作，赢得客户的一致好评与信任。基因有限公司将一如既往的支持越来越多的PacBio用户。
基因有限公司作为NanoDrop超微量分光光度计中国区独家代理和 Agilent自动化电泳产品线的中国区代理，可为PacBio用户提供完整质控方案。
