Stellaris® 技术
随着近年来转录组研究迅猛，以及高水平杂志对数据准确性的要求越来越高，要确定前期筛选靶标的表达量、分子功能及作用机制，必须经过原位的验证。对靶基因进行组织学水平或者细胞学水平的单分子RNA 原位杂交可以实现对研究对象的精准原位定量。越来越多的研究者采用RNA FISH，除了是对传统蛋白水平IHC/IF和DNA 水平DNA FISH原位验证的有力补充，StellarisTM RNA FISH由于不受抗体的限制，在肿瘤、病毒、神经疾病、植物、微生物及特殊物种研究领域有着独特的优势，且对于时下热门的lncRNA、miRNA、cirRNA等不表达蛋白的非编码RNA，也是很好的选择。
StellarisTM RNA FISH---单分子水平的RNA原位、多重、定量技术
传统的RNA原位杂交技术局限于灵敏度、特异性不高，而大部分RNA在细胞中的拷贝数都很少，所以高灵敏度的原位杂交技术就显得尤其关键。此外，传统的比如地高辛的方法，实验操作上也很繁琐耗时，通常需要五天左右的时间。而StellarisTM RNA FISH技术不仅可以达到单细胞单拷贝级别灵敏度，而且操作简单快速，仅需一步杂交，一天内即可完成单分子RNA FISH检测！
一步法杂交
Stellaris RNA FISH 通过48 个荧光标记的probe与同一条靶标RNA在半连续的位置结合；每条RNA结合多根荧光probe之后，在普通宽场显微镜下形成一个独立的光斑（衍射极限），通过观察光斑位置及个数，即可完成单分子水平的RNA定位及定量。仅需一步杂交，即可完成smFISH检测。
操作简单，无需特殊处理，仅需4步：1. 准备样品 2. 恒温杂交 3. 样品清洗 4. 图像采集
探针设计和DesignReady探针组
Biosearch Technologies 提供在线探针设计软件，针对目标RNA 设计特异的Stellaris RNA FISH 探针组。
同时，针对常见RNA序列，我们也提供DesignReady探针组：
其预设计好，并经过严格的生物信息学分析，能够很好的保证探针特异性。
多数采用以下Biosearch特色的高效荧光染料进行标记：CAL Fluor® Red 590, Quasar® 570, CAL Fluor Red 610, 和Quasar 670。
DesignReady探针组列表
https://www.biosearchtech.com/products/rna-fish/designready-stellaris-probe-sets
快点击查看您的基因是否是DesignReady！
Stellaris所有在库并经过验证（DesignReady）的探针目前有4476种。
涉及人、小鼠、大鼠、中国仓鼠、斑马鱼、线虫、Zika病毒、果蝇、酵母菌、大肠杆菌、猕猴、猪、牛、犬、鸡、马、猫、绵羊、青蛙、报告基因等19个物种的多种癌症相关基因、重要LncRNA及其它mRNA。
DesignReady部分癌症相关重要Targets：
癌症研究应用界面：
https://www.biosearchtech.com/support/education/stellaris-rna-fish/applications/cancer-RNA-FISH
DesignReady部分重要LncRNA Targets：
LncRNA研究应用界面：
https://www.biosearchtech.com/support/education/stellaris-rna-fish/applications/lnc-rna-fish
Stellaris RNA FISH单分子荧光原位杂交的优势
传统的原位杂交技术除了灵敏度受限，还不能做多重，无法定量，操作上也比较耗时和复杂，Stellaris RNA FISH单分子荧光原位杂交却很好的解决了这些问题。
灵敏度高：可检测单细胞、单拷贝RNA分子；
特异性好：多组探针设计，潜在脱靶效应或少数RNA降解可忽略，有效避免假阳性
操作简单：无抗体抗原结合的繁琐步骤；一天即可得到结果
适用性广：无物种限制（植物、动物、微生物等）；无样本限制（细胞、组织、石蜡切片（FFPE）、全组织…）；无需特殊仪器与配套试剂
探针设计灵活，荧光标记灵活
多重共定位：多靶点RNA共定位；RNA与蛋白共定位；寡核苷酸探针与其它原位技术兼容性好
简便，快速，开放的实验体系: 仪器和试剂开放，无需特殊仪器与配套试剂，可自行配置试剂，也可购买其优化的杂交与洗涤Buffer。
Stellaris技术应用
观察RNA在细胞和组织中的空间定位
运用多重检测，研究不同RNA分子的共表达
研究不同细胞或组织中同一Target表达的空间差异性
研究不同时间点/段病毒侵染与转移的情况
与IF、IHC、ICC或DNA FISH等结合，研究同一Target RNA、DNA及其蛋白表达与定位的时空差异（Biosearch提供RNA FISH与IF同时进行的Protocol）
Post-transcriptional Modifications Contribute to the Upregulation of Cyclin D2 in Multiple Myeloma.
Misiewicz-Krzeminska et al. Clinical Cancer Research. 2016. url: https://dx.doi.org/10.1158/1078-0432.CCR-14-2796
G1/S Inhibitors and the SWI/SNF Complex Control Cell-Cycle Exit during Muscle Differentiation.
Ruijtenberg et al. Cell. 2015. url: https://dx.doi.org/10.1016/j.cell.2015.06.013
Genome-wide profiling of p53-regulated enhancer RNAs uncovers a subset of enhancers controlled by a lncRNA.
Leveille et al. Nature Communications. 2015. url: https://dx.doi.org/10.1038/ncomms7520
Niche appropriation by Drosophila intestinal stem cell tumours.
Patel et al. Nature Cell Biology. 2015. url: https://dx.doi.org/10.1038/ncb3214
FuseFISH: robust detection of transcribed gene fusions in single cells.
Semrau et al. Cell reports. 2014. url: https://dx.doi.org/10.1016/j.celrep.2013.12.002
Proteostatic Control of Telomerase Function through TRiC-Mediated Folding of TCAB1.
Freund et al. Cell. 2014. url: https://dx.doi.org/10.1016/j.cell.2014.10.059
Single-molecule transcript counting of stem-cell markers in the mouse intesting.
Itzkovitz et al. Nature Cell Biology. 2011. url: https://dx.doi.org/10.1038/ncb2384
请访问Citation Center 网站获取完整的文献列表信息。
https://www.biosearchtech.com/support/resources/stellaris-citation-center
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Nature Communications: 利用单分子荧光原位杂交揭示LncRNA调控植物春化作用机制
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单分子RNA FISH，荧光原位杂交新时代
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