背景介绍:
我国常采用的菌种保藏法有:斜面低温保藏、液体石蜡保藏、冷冻干燥保藏、液氮超低温法。国际上(ATCC)常采用的方法有:冷冻干燥法、液氮超低温法。
冷冻干燥是目前应用较广泛、效果较好的一种菌种保藏方法。冷冻干燥法是指:在极低温度下(-70℃左右)快速冷冻,然后在极低温度下真空干燥,使菌体细胞结构成分保持原来的状态。在低温、干燥和真空条件下,使菌种的新陈代谢活动处于高度静止的状态,该法可使菌种保藏10~20年,仍不降低其原有性能。
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冷冻干燥法保存菌种的步骤和主要注意事项如下:
1.安瓿瓶的准备
安瓿瓶要选择可以经受较大温差而不会破裂的玻璃,先进行清洗烘干再加棉塞进行灭菌备用。
2.保护剂的选择
保护剂是为了防止细胞在冻干过程中损伤和死亡。多数菌种采用脱脂牛奶作为保护剂。
3.冷冻干燥设备的选择
通常包含真空泵、冷阱、样品仓、控制系统。可以根据样品的通量进行配置的选择,LaboGene品牌的冻干机有多种多样的配置可以进行选择。
4.制备孢子液
用接种针挑取孢子接入盛有无菌脱脂牛奶的试管中,搅动成悬浮液。将0.2mL悬浮液分装到安瓿瓶,瓶口塞好棉花。
5.预冻孢子液
将盛有孢子液的安瓿瓶,放到超低温冰箱或者超低温冷阱中预冻1小时。只需4~5 min,温度便可达到-70℃。
6. 真空冷冻干燥操作
开启冻干机,进行真空干燥。
7.真空熔封
真空干燥结束后,立即取出安装在封口用的玻璃抽气管上,进行抽气熔封管口。
由于真空干燥保藏的菌种是密封在安瓿瓶里的,因此不仅邮寄运输方便,而且不会污染杂菌。该方法在国内和国际上应用较为普遍。
LaboGene真空冷冻干燥系统:
基因有限公司自有品牌LaboGene冷冻干燥机,拥有丰富的型号选择,既可以实现原位冻干,避免菌液转移过程的融化风险,又可提供 -95℃、 -100℃ 、 -110℃等不同的超低温度冷阱的选择,避免菌液冻干过程中的样品坍塌,还可以提供专门用于安瓿瓶样品冻干的支架,以实现真空下进行菌种保藏样品的熔封,避免污染。
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