新鲜出炉！新一代微流控单细胞分析筛选系统——实测数据表现！

将标记有蓝、绿、橙、红四个不同颜色膜染料的四个细胞样本混合并加载到Cyto-Mine® Chroma上。在分选过程中，用一种染料对细胞进行门控，排除所有其他染料，然后进行分配，四种细胞样本经过分选和分配的准确性分别为：蓝色＞98%，绿色＞99%，橙色＞97%，红色＞98%，可见Cyto-Mine® Chroma可实现对皮滴中包裹的活细胞的准确分选和门控。

图1：Cyto-Mine® Chroma分选和门控的准确性。（A）分选过程中门控的示意图。（B）检测使用的荧光染料列表。（C）门控策略的示例，用于分选相应的细胞群。（D）使用（C）中所示的门控策略分选的蓝、绿、橙和红色标记细胞的分配群的点图。（E）分配细胞的示例图。（F）使用分配细胞的显微镜数据来确定分选期间门控的准确性。

为了检测分泌抗体的细胞，用不同的染料标记两种不同的杂交瘤细胞系并与抗小鼠IgG FRET探针对混合，加载到Cyto-Mine® Chroma上。在分选时首先通过FRET+响应然后对蓝色细胞进行门控并分配细胞。由图2F可知，细胞分选的准确度可达100%。

图2：分选抗体分泌细胞。（A）分选中检测和门控策略的示意图。（B）检测使用的荧光染料列表。（C）利用FRET+对细胞进行门控，然后仅对蓝色细胞进行门控。（D）分配的细胞群。（E）分配细胞的示例图。（F）使用分配细胞的显微镜数据来确定分选期间门控的准确性。

为了检测抗原特异性抗体结合，将分泌抗体的杂交瘤细胞（用蓝色标记）与表达特异性抗原的靶细胞（用红色标记）混合。使用绿色染料标记检测抗体来检测抗体与靶细胞的结合。将细胞加载到Cyto-Mine® Chroma上，并分选含有局部抗体分泌细胞（ASC）、靶细胞和检测抗体的液滴：在分选过程中对皮滴进行两次门控（图3F），首先检测ASC的存在和抗体结合，然后对靶细胞的存在进行门控。Cyto-Mine® Chroma的多路复用特性可以在单个实验中分析多个因素，从而提高筛选效率。

图3：通过表面结合实验分选ASC。（A）分选中检测和门控策略的示意图。（B）检测使用的荧光染料列表。在不存在（C）或存在（D）西妥昔单抗的情况下，将红色标记的A431靶细胞与绿色染料标记的抗体混合。将细胞加载到Cyto-Mine® Chroma上，并针对红和绿色信号进行门控。（E）使用FRET探针对检测ASC的IgG分泌。（F-G）在AF 488检测抗体存在下，将蓝色标记的ASC与红色标记的靶细胞混合。在分选过程中对皮滴进行两次门控（F），首先检测ASC的存在和抗体结合，然后对靶细胞的存在进行门控，并分配到96孔板中。（G）使用荧光显微镜对分配的细胞进行成像以验证门控筛选效果。

将分泌人IgG 4κ抗体的CHO细胞系与Cyto-Cellect®探针对（供体偶联AF 488（绿色），受体偶联AF 594（橙色））和活性染料（偶联AF 670红色）混合。将细胞加载到Cyto-Mine® Chroma上并孵育1小时。对液滴进行门控，以确定是否存在FRET+活细胞。分配液滴，并使用Flowjo软件确定门控和分选的准确性。

图4：在皮滴中区分FRET+凋亡细胞与活细胞。（A）分选中检测和门控策略的示意图。（B）检测使用的荧光染料列表。（C）分选过程中细胞的门控。（D）活细胞与凋亡细胞群体中FRET反应的分析。