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光密度（OD）是一个没有单位的密度参数。作为定量分析寡核苷酸浓度的常用方法，该技术基于溶液中物质对光的散射特性。通过比尔-朗伯定律（如下），可利用该物理特性计算溶液密度。该定律描述了溶液中物质浓度与光通过溶液时散射程度之间的定量关系。溶液中寡核苷酸浓度越高，光散射效应越显著。
比尔-朗伯定律：A = Ɛlc
A = 吸光度
Ɛ = 消光系数
l = 光程长度
c = 摩尔浓度（单位：mol/L）
比尔-朗伯定律示意图
吸光度通过分光光度计进行测量。仪器校准差异可能引入测量偏差。溶液的充分混匀程度也会显著影响最终吸光度值，因为同一台仪器测量相同样品时，若待测物质出现沉降，可能导致吸光度读数差异。光程长度特指分光光度计中装载样品的比色皿宽度，标准比色皿宽度为1厘米。
使用OD法测定浓度的局限性在于，每种物质对光的散射特性具有特异性。为校正这种物质特异性差异，需引入消光系数（Ɛ）变量用于浓度计算。每个寡核苷酸都具有独特的消光系数（Ɛ），且该数值会随波长改变。必须确保使用与测量吸光度时相同波长对应的消光系数值。即使两种寡核苷酸长度相同，其特异性序列也会影响消光系数。因此，两个OD值为1的寡核苷酸可能具有显著差异的实际浓度。
在寡核苷酸中，OD值可以定义为：
在260nm波长下，使用1 cm光程的石英比色皿，1 mL水溶液中的吸光度为1（Absorbance, A）。1 OD值对应的单链DNA质量约为33 μg。
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常规PCR扩增：1 OD引物可完成200~500次50 μL反应。
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基因拼接或连接反应：仅需0.5~1 OD即可满足实验需求。
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长片段合成（如全基因合成）：由于合成效率较低，需适当增加OD数（如5~10 OD）以补偿损耗。
二、OD与其他浓度单位的换算
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单链DNA（ssDNA）：1 OD≈33 μg
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双链DNA（dsDNA）：1 OD≈50 μg
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单链RNA：1 OD≈40 μg
