前言
在组织免疫染色（IHC/IF）和原位杂交（ISH）中，信号检测常常面临多重挑战：靶标表达量低、样本自体荧光强（尤其在FFPE、脑组织、肝组织、肿瘤坏死区等样本中），加之组织结构复杂，目标信号容易被背景淹没。传统优化方法，如增加一抗浓度或延长孵育时间，往往非但不能有效提升信噪比，反而会导致更高的非特异性结合和背景干扰。此外，在多重染色实验中，还常遇到二抗交叉反应、通道串扰，以及弱靶标在多轮操作后信号衰减等问题。因此，同时实现“高灵敏度、低背景、多色兼容”的需求日益迫切。在此背景下，TSA（Tyramide Signal Amplification，酪胺信号放大）技术应运而生，并逐渐成为主流的信号放大策略。
原理
酪胺信号放大技术（TSA, Tyramide Signal Amplification） 是一种基于辣根过氧化物酶（HRP）催化的高灵敏度检测方法。
其核心原理是：在H₂O₂存在下，HRP催化荧光素或生物素标记的酪胺分子形成自由基。这些自由基迅速与靶点附近蛋白上的富电子氨基酸残基（如酪氨酸）发生共价结合，实现高密度原位沉积。这一过程可在短时间内显著增强信号强度，同时保持良好的空间分辨率。
相比传统依赖增加抗体浓度的策略，TSA能在不显著升高背景的前提下有效放大信号，特别适用于免疫组化（IHC）、免疫荧光（IF）和原位杂交（ISH）中弱表达靶标的检测。此外，TSA支持顺序多重染色，在肿瘤免疫微环境、神经科学和空间生物学研究中，被广泛应用于复杂样本中多种标志物的共分析。
TSA产品主要包括两大类：
●
新荧光直接标记型（TSA-IF）：标记后可直接在标准或共聚焦显微镜下观察
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生物素偶联型（TSA-Biotin）：可通过链霉亲和素系统进一步放大信号，或应用于蛋白质相互作用研究（如临近标记），为多重标记及信号增强提供灵活解决方案。
TSA检测原理图
传统荧光荧光标记（多标）和TSA多标免疫荧光区别：
特点
应用
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组织或细胞原位蛋白检测（IHC/IF）
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核酸原位杂交的信号增强（ISH/FISH）
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多重免疫荧光（mIF）
■
蛋白互作邻近标记技术 （PLA）
操作步骤
荧光选择
产品推荐（工具包）
应用举例（高分思路参考）
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心血管疾病
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动脉粥样硬化领域
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脑神经科学（癫痫与光遗传学）
▣
原位杂交（In Situ Hybridization）
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脑神经科学（星形胶质细胞异质性）
▣
原位杂交（In Situ Hybridization）
■
肿瘤免疫学（癌症免疫治疗）
▣
邻位标记质谱分析（Proximity Labeling-Mass Spectrometry, PL-MS）
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神经科学（星形胶质细胞-神经元相互作用，亨廷顿病）
▣
细胞表面蛋白邻近标记
常见问题
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参考文献：
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🔗https://doi.org/10.1016/j.neuron.2025.05.019
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