精准之选——数字PCR

      数字PCR即baiDigital PCR（dPCR)，它是一种核酸du分子绝对定量技术。相较于qPCR，数字PCR可让你能够直dao接数出DNA分子的zhuan个数，是shu对起始样品的绝对定量。一般包括两部分内容，即PCR扩增和荧光信号分析。

     PCR实际上是一个在模板DNA、引物(模板片段两端的已知序列)和四种脱氧核苷酸等存在的情况下，DNA聚合酶依赖的酶促合成反应，扩增的特异性取决于引物与模板DNA的特异结合。

      数字baiPCR是一种DNA绝对定量技术。du当前DNA定量有三种，光度法基于zhiDNA分子dao的吸光度来定量zhuan；实时荧光定量也就是real time-PCR基于shuCt值，也就是可以检测到荧光值对应的循环数定量；数字PCR是最新的定量技术，他基于单分子PCR方法来采用计数的方法对DNA进行定量，因此是一种绝对定量的工具。主要采用当前分析化学热门研究领域-微流控的方法，将大量的稀释后的DNA溶液分散至芯片的微反应器中，每个反应器的DNA模板数少于或者等于1个。这样经过PCR循环之后，有一个DNA模板的反应器就会亮，没有DNA模板的反应器就是暗的。根据相对比例和反应器的体积，就可以推算出原始溶液的DNA浓度。不同于qPCR（实时荧光定量PCR）对每个循环进行实时荧光测定的方法，数字PCR技术是在扩增结束后对每个反应单元的荧光信号进行采集，最后通过直接计数或泊松分布公式计算得到样本的原始浓度或含量。

· 与qPCR相比，提升了PCR的检测灵敏性（0.01%以上）；

· 无需标准品实现绝对定量；

· 提高PCR扩增效率；

· 提高数据检测可重复性/稳定性；

· 降低抑制因素对扩增的影响。

     数字PCR是继实时荧光定量PCR之后，发展起来的一种绝对定量分析技术。通过将单个DNA分子转移入独立的反应室，PCR扩增反应后，对荧光信号进行检测分析，实现单分子的绝对定量。数字PCR技术摆脱了对标准曲线的依赖，具有更高灵敏度和准确度，在基因突变检测、拷贝数变异检测、基因表达分析、微生物检测、转基因食品检测以及下一代测序等方面均得到广泛应用。