你知道不 同 技 术 的 数 字 PCR吗？

郭：
     微流控技术的发展使得数字 PCR 的操作相对便捷，且液滴生成的固相体系相对稳定。随着新技术和算法的发展，数字 PCR 将获得卓越的置信水平和真实可信的数据结果，同时推动其在不同检测和应用需求方面的应用，如单细胞核酸检测T790M/C797S 的顺式或反式的鉴定。数字 PCR 是一种新兴的检测方法。作为一种全新的思路和手段，临床对其应保持一种包容的心态。此检测平台将有助于临床深入到分子生物学研究的更高层次。

刘：
     数字 PCR 更擅长对已知极微量核酸标本、复杂背景下稀有突变和表达量微小差异的标本进行检测，而测序技术主要针对未知核酸或复杂标本进行分析。如果未来可以有对液滴的检测更加直观的检测技术，无疑能更好地推动数字 PCR 在临床的实际应用。

娄：
     想到最多的是开发多靶点检测的多重数字 PCR 检测，可以通过两种方式实现，

(1) 使用多种荧光染料来标记不同的待测靶基因，利用多个荧光检测通道来实现；

(2) 采用单波长多强度技术，使用一种荧光染料，但是扩增结束时不同靶基因对应染料的荧光强度不同。

(3) 其次，目前的数字 PCR 大多采用荧光检测手段，虽然较为便捷和灵敏，但需要依赖昂贵的光学仪器和摄像设备，而且PCR结束后离线检测耗时耗力且容易引入污染，设想未来可以研发出一种能够在线监测且低成本、高速度、高通量的检测方法，目前比较有前景的是电化学生物传感器。另外 3D 打印微流控芯片技术相对于传统的微流控加工技术具有设计加工快速、材料适应性广、集成化程度高、精度更高、成本更低的特点，对于微流控芯片数字 PCR 技术的推广应用具有积极的意义。

田：
     与已有分散方法相比，基于打印的样品分散法具有更好的效果，该平台具有自动化和反复使用的特点。液体弹珠样品分散法可以满足手持数字 PCR 设备的所有要求，各种移动技术均可用于液体弹珠。该方法将惰性疏水物质包裹在内部含PCR混合物的液滴上，使得进行热循环相对简单。此外，惰性疏水粉末不与 PCR 混合物反应，避免污染。焦耳加热法因其加热时间控制简易，与活性 TEC 结合，使加热、冷却的最佳斜坡速率优化了扩增效率，不失为一种理想的数字 PCR 热循环方法。基于 LED 的照明系统几乎可以满足未来数字PCR 系统的所有要求。低成本数码相机作为探测器。数据处理模块及整个设备可以由低廉的微型计算机控制。使用自主开发的图像处理和输出量化的软件大大降低系统成本。基于智能手机的荧光检测仪也在一定程度上降低硬件复杂性和成本。这些新技术都将在未来促进数字PCR 的发展。

郭：
数字 PCR 的发展方向包括：(1)提高检测通量，可对多个靶标多个标本并行检测；

(2)提高检测自动化程度，实现一键式检测的自动化检测流程；(3)提高检测速度，进一步降低检测时间；(4)提高检测动态范围；(5)降低检测成本。这些提高，将会使数字 PCR 用于更多分子检测。目前，非常需要国产高端科学仪器和医疗器械能够站起来。人们高兴地看到有识专家，与国产技术合作，对其进行评估和指导，一起推动技术的进步，体现了新时代专家的气度和远见。