什么是荧光内滤效应？
荧光内滤效应是指由于溶液浓度太高，靠近样品池前边分子发射的荧光被后面分子吸收，使得检查到的荧光强度反而小于低浓度溶液的现象。
内滤效应的成因。
为什么会有内滤效应？内滤效应通常来自两个方面：
1. 物质对激发光的竞争吸附作用，这种竞争吸附作用，会减少有效实际作用于荧光物质的光强，导致物质的荧光实际强度下降；
2. 发射荧光强度的吸收，这种情况不仅会使荧光光谱的强度下降，而且会使光谱出现非三线性结构，也就是畸变的光谱区域。
上面所讲的激发光被吸收的现象为初级内滤效应。此外，如果测试样品的激发光谱和发射光谱发生重叠，则样品发射的光可以被样品本身再次吸收。这种现象称为二级内滤效应。
内滤效应是荧光光谱中的常见问题。内滤效应会导致光谱失真，在某些情况下会使得信号完全丢失，因此，我们在测试时需要注意，防止这种效应。
如何避免内滤效应呢？
避免内滤效应的最佳方法是降低样品浓度。理想情况下，应在测量之前测试样品的吸收光谱。通常，当样品在激发波长下的OD值小于0.1时不会出现内滤效应。如果出现内滤效应时，可以考虑以下方法：
1. 改变激发波长，以减少样品的二次吸收。建议将激发移至最大吸收以下10-50nm，避免次级内滤效应；
2. 使用微量比色皿或三角比色皿。这样可以减少光程长度，从而减少样品的吸光度。
3. 在爱丁堡的光谱仪器中，可将比色皿放在前表面样品支架中。该支架不仅可以放置固体样品，还可放置比色皿。可以检测激发光束照射到比色皿前端样品的发光信号，从而进一步减少了路径长度。
