“抗非护猪保生产”系列课程之
《非洲猪瘟的检测技术与运用》
3月12日正业生物云学堂进行了“抗非四式 护猪三招”第二课，由北京中农快检公司副总经理刘建兴针对《非洲猪瘟的检测技术与运用》做了详实的讲解。
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01
对当前非瘟形势及业态变化的几个判断
1、中国非洲猪瘟病毒已经形成较大污染面，带毒生产是常态；
2、当前市场普遍缺猪，不论大小，保住猪就能够赚钱；
3、猪场免疫工作极薄弱、小散户一塌糊涂、经销商日子极难过。
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02
二、 非瘟检测的技术原理
在猪场非瘟实验室检测过程中，由很多种方法和手段，各有优劣势。刘建兴认为，猪场在选取中，选择合适自己的才是正确的。
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03
非瘟检测常见问题
刘建兴用详实的数据及案例列举非瘟检测过程中遇到的问题，并对如何避免出现进行了总结：
1、如何判断ASF阴阳性？判断PCR的阴性和阳性：S型是关键；
2、非瘟检测结果阳性意味着什么？不一定就是感染非瘟，这只是检测到核酸片段，并不是检测到活病毒。
3、如果一个猪场非瘟检测结果为阳性，但后期养殖正常，可能3个原因：一是检测到了被杀灭的病毒片段；二是检测到了活毒，但猪群耐过了；三是检测人员操作失误，导致了“阳参污染”或“样本交叉污染”。
4、血样、血清、组织、口鼻试子、环境等样本的采样、保存与运输要规范。
5、混样原则：依据准确性与快捷性优先、拔牙检测不要混样、环境样品不建议混样，混样只能是相同区域或整群清场检测，可考虑适当混样，通常不超过5份样本混样。
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04
快速检测技术在精准清除中的应用
刘建兴认为猪场在ASF感染压力大，进行检测和精准清除时以下几点要注意：
1、最好自检。如若送检，距离远，时间长，送样难，易变质。异常猪1天两检，日常猪只5天一检。
2、精准清除成功四要素：早、准、快、狠。
3、不同时期清除要领：
a.未表现临床症状时进行“点杀”发病猪；
b.少量检测是阳性时进行对发病猪只实行“栏杀”；
c.大量检测是阳性时需要“圈杀”；
d.出现疑是“猪瘟、蓝耳”等症状及检测是阳性时需要“栋杀”；
e.较严重出现大量出血时可以“反向清除”，把未感染的猪移出，隔离饲养。
f.在精准清除中，唾液检测优于血液检测。
g.精准清除中采样要全覆盖：同栋异常猪及四周100%；其它栋抽样。
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05
快速检测技术在复产中的应用
刘建兴就复养失败原因、采样方法原则及复养案例进行分享总结：复养失败原因之一是样品采集及检测不全面、不准确、不到位。
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精彩答疑
Q
在当前哪一种检测更准确、高效？
答：目前主要有血清学及分子生物学检测两类。分子生物学检测更准确、高效，分子生物学检测应用较多的是变温PCR（聚合酶链式反应）及等温扩增技术。我们要根据自己实际进行选择，做好平行比对。
Q
非瘟什么时间产生抗体？抗体还没产生就死了如何解释？
答：1）ASFV在猪体内一般7天就产生抗体，到14天抗体就比较高了。
2）有报道称，在ASFV感染过程中因病毒血症和炎症风暴多数被感染猪只在产生抗体前就会死亡。
Q
自检的投入要多少钱？
答：非瘟ASFV检测费用在100-150元/样本。猪场尽量自检，好处是快、对样本的要求比较低，检测更准确。
Q
血液离心出血清后，放置一会儿有胶冻样，会影响检测结果吗？
答：不会。胶冻样物形成原因是血清中凝血因子作用，可将胶冻样物去除，因为检测需要样本量≤20微升，不影响实验结果。
Q
环境采样的注意事项？
答：环境样本包括液体样本和固体样本。
1）液体样本只需要用吸管吸取几毫升，或用棉签蘸取放入离心管中。
2）固体表面等样本，需要先用生理盐水沾湿棉签，然后在表面反复刮擦，最后在离心管中洗脱。
环境样本因为含有较多杂质，可能会抑制核酸扩增，因此建议对样品进行离心处理，使用核酸提取试剂盒进行提取。
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下期课程预告：
编 辑｜王 岩
责任编辑｜徐 敏
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