想必大家经常听见IHC和IF实验以及现在大热的TSA，在抗体详情介绍的应用里也经常写了IHC和IF，那么到底什么是IHC、IF以及TSA呢？这三者之间又有什么不同的地方？今天就让我们好好分辨一下~
TSA是酪酰胺信号放大技术（Tyramide Signal Amplification）简称，是利用辣根过氧化物酶（HRP）催化酪胺底物，产生大量的酶促产物，这些产物能与周围的蛋白残基共价结合，从而在抗原-抗体结合部位形成高密度的标记，实现信号的几何级放大。
IHC是免疫组织化学（immunohistochemistry）的简称，是一种应用免疫学基本原理——抗原抗体反应，通过化学反应使标记抗体的显色剂显色来确定组织细胞内抗原（多肽和蛋白质）的技术。
IF是免疫荧光（Immunofluorescence）的简称，是利用荧光标记的抗体作为探针对组织或细胞内特定抗原进行定位和定性分析。
● TSA vs. IHC：注意样本自发荧光
都依靠HRP的催化作用：IHC形成DAB沉淀，TSA形成活性荧光化合物。TSA信号放大作用显著强于DAB，特别是枝杈荧光TSA。请适量降低根据IHC 确定的一抗浓度。TSA荧光多标需考虑样本自发荧光的影响，如角蛋白丰富的样本、脂褐质丰富的脑组织和淋巴瘤样本、骨组织及骨髓样本、过固定样本等。请在开始标记前确定样本是否有自发荧光。可利用TissueGnostics的光谱拆分功能对背景荧光进行扣除，或在标记时避免使用和自发荧光同一通道的TSA染料。
● TSA vs. IF:防止信号放大过度
TSA信号放大过度现象在以IF为经验的用户中比较突出，特别是细胞TSA荧光标记。
TSA和IF虽然都属于荧光信号放大，但原理不尽相同。IF流程无需去除内源性过氧化物酶；TSA标记请务必去除组织或细胞中的内源性过氧化物酶，特别是肝脏、肾脏、骨、免疫器官来源的组织和细胞，否则会造成较强
的背景染色。
IF:信号等比放大；TSA:信号非线性放大
IF:1 -2个二抗可结合1 个一抗，1 个二抗可标记1 -3个荧光分子＞信号最多放大2X3 = 6倍。
放大效应不会随着时间延长。
TSA:HRP酶促反应在线性期内(0~T2)可持续活化1 0-1 000个荧光分子，反应最终饱和，进入平台期(T2-T3)。平台期之后，不同位点之间信号的差异会被逐渐拉平。
以CEP1 64的表达为例:CEP1 64在细胞中心体中高表达，在睫状囊泡中低表达，但在TSA标记过程中，过长反应时间(1 5 min)缩小了这种差异，让睫状囊泡中的信号看起来和中心体一样强。
由此可见,TSA对于低丰度靶点的检出具有巨大优势，但也要考虑信号放大过度造成的影响：
对于中高丰度靶点，请从原一抗浓度1 /1 0-1 /5开始测试使用TSA。
细胞实验请将TSA从1 :20~50稀释开始测试。
设置反应时间梯度，记录最佳反应时间。
如需考虑表达差异，应在T2之前中止反应。
我们提供多种试剂盒，适用多种荧光通道
| 产品名称 | 目录 | 规格 |
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包含50μL染料3支和100μL核染料1支(TG520N、TG620N、TG670N、DAPI)、显色缓冲液1瓶 |
50μL/100μL |
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包含50μL染料4支和100μL核染料1支(TG520N、TG570N、TG650N、TG700N、DAPI)、显色缓冲液1瓶 |
50μL/100μL |
高能TSA六色染料组合 |
包含50μL染料5支和100μL核染料1支(TG440N、N T G 5 2 0 N 、 T G 5 7 0 N 、 T G 6 5 0 N 、 T G 7 0 0 N 、TG470SN)、显色缓冲液1瓶 |
50μL/100μL |
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包含50μL染料6支和100μL核染料1支(TG440N、TG520N、TG570N、TG650N、TG700N、TG780N、TG470SN)、显色缓冲液1瓶 |
50μL/100μL |
高能TSA八色染料组合 |
包含50μL染料7支和100μL核染料1支(TG440N、TG520N、TG570N、TG620N、TG650N、TG700N、TG780N、TG470SN)、显色缓冲液1瓶 |
50μL/100μL |
高能TSA九色染料组合 |
包含50μL染料8支和100μL核染料1支(TG440N、TG520N、TG570N、TG620N、TG650N、TG700N、TG780N、TG560S、TG470SN)、显色缓冲液1瓶 |
50μL/100μL |
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包含50μL染料3支和100μL核染料1支(TG520N、TG620N、TG670N、DAPI)、显色缓冲液1瓶、修复/速除二合一缓冲液1瓶、3%双氧水1瓶、封闭液1瓶、一抗稀释液1瓶、水晶封片剂1瓶 |
50μL/100μL |
高能多色解决方案五色套装 |
包含50μL染料4支和100μL核染料1支(TG520N、TG570N、TG650N、TG700N、DAPI)、显色缓冲液1瓶、修复/速除二合一缓冲液1瓶、3%双氧水1瓶、封闭液1瓶、一抗稀释液1瓶、水晶封片剂1瓶 |
50μL/100μL |
高能多色解决方案六色套装 |
包含50μL染料5支和100μL核染料1支(TG440N、T G 5 2 0 N 、 T G 5 7 0 N 、 T G 6 5 0 N 、 T G 7 0 0 N 、TG470SN)、显色缓冲液1瓶、修复/速除二合一缓冲液1瓶、3%双氧水1瓶、封闭液1瓶、一抗稀释液1瓶、水晶封片剂1瓶 |
50μL/100μL |
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包含50μL染料6支和100μL核染料1支(TG440N、TG520N、TG570N、TG650N、TG700N、TG780N、TG520N、TG570N、TG650N、TG700N、TG780N、1瓶、3%双氧水1瓶、封闭液1瓶、一抗稀释液1瓶、水晶封片剂1瓶 |
50μL/100μL |
高能多色解决方案八色套装 |
包含50μL染料7支和100μL核染料1支(TG440N、TG520N、TG570N、TG620N、TG650N、TG700N、TG780N、TG470SN)、显色缓冲液1瓶、修复/速除二合一缓冲液1瓶、3%双氧水1瓶、封闭液1瓶、一抗稀释液1瓶、水晶封片剂1瓶 |
50μL/100μL |
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包含50μL染料8支和100μL核染料1支(TG440N、TG520N、TG570N、TG620N、TG650N、TG700N、TG780N、TG560S、TG470SN)、显色缓冲液1瓶、修复/速除二合一缓冲液1瓶、3%双氧水1瓶、封闭液1瓶、一抗稀释液1瓶、水晶封片剂1瓶 |
50μL/100μL |
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