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空白回测的意义和结果判断

空白回测的意义和结果判断 迅益生物
2024-06-28
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导读:确保测量结果可靠第一步很重要

    空白回测是超微量分光光度计在使用中常见的操作,通过空白回测,可以获得样品台的清洁状态,以及空白溶液的质量等信息,这对于后续的样品测量结果的可靠性是非常重要的。

什么是空白回测


    空白回测是指,在使用空白溶液进行空白测量后,再次测量空白溶液获得吸光值数据。很多用户在样品测量前,都会先做空白回测的操作,在确认回测数据正常后,再进行待测样品的测量。在样品台清洁的状态下,空白回测会获得很小的吸光值读数。而当空白回测的数值较大,则说明样品台或设备异常或空白溶液有污染,此时如直接进行待测样品测量,则可能引入较大的误差。


空白回测的判定


    对于市面上绝大多数的超微量分光光度计而言,空白回测读数的正常范围通常小于±0.05A(10mm)。由于浓度读数涉及到不同样品的消光系数,因此通常看吸光值,如核酸测量时,看A260吸光值,蛋白测量时看A280吸光值。如果空白回测的值出现较大的正数或负数偏差,则说明存在问题。


较大的负数是相对常见的,如A260= -0.15A(相当于7.5ng/μl dsDNA),可能的原因:


1,样品台未有效清洁,如样品台上有样品残留,当进行空白测量时,空白溶液实际上是含有样品的,设备以此作为空白基准。将空白溶液擦拭掉,再次滴加空白溶液进行空白回测,此时的空白溶液是不含有样品的,使用差减法扣除空白读数时,就会出现较大的负值,也就是说空白比样品浓度还要高。

2,质量较差的或不适宜的空白溶液,当空白溶液本身存在污染或颗粒物,或在待测波长处有较大吸收时,测量是不稳定的,也将随机的产生正负偏差。

3,不排除设备的光学路径或检测器存在问题,

空白回测结果为较大的正数,如A280= 0.12A,可能的原因:

1, 质量较差的或不适宜的空白溶液,当空白溶液本身存在污染,或在待测波长处有较大吸收时,测量是不稳定的,也将随机的产生正负偏差。

2, 设备的光学路径或检测系统存在问题,导致较大的准确性或精确性误差。需通过彻底的清洁及设备检测以排除问题。


Blank ControlTM 空白质量控制


    如果您选用的是Implen的NanoPhotometer®,设备除了具有Sample Control TM以分析样品中存在的问题之外,还可通过Blank ControlTM空白质量控制功能,确保空白溶液的质量及样品台的清洁状态。当进行空白测量时,设备将通过光量子计数的方式及算法,在多个波长区间内,分析空白溶液中是否具有高吸光值的物质,并进行详细的提示。用户可根据待测样品的检测波长,判断空白溶液是否可以使用。

    是否需要空白回测,取决于常测样品的性质,操作习惯,设备的自检功能等诸多因素。NanoPhotoemeter®的样品台及反射镜面使用高质量的石英材质,用户在正常的操作规程下,常规样品非常易于清洁,对于较易残留的样品,可结合空白回测以进行清洁验证和设备硬件系统的检测,全方位的确保样品测量数据的可靠性。



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