今天我们继续来聊聊从物理、化学到电子等各个方面看噪音的来源,以及寻找如何减小和消除噪音的方法。
流动相脱气不好
对流动相进行脱气,不仅仅是为了防止系统里面气泡的产生。流动相脱气越好,基线就会越好。如今最常用的脱气方式是在线脱气机,但是有的时候脱气并不彻底,所以当有基线噪音问题时,可以考虑采取多种的脱气方式。
系统洁净程度
前面讲的都是内在原因,造成的基线噪音或者波动。如果你前面的原因都找过了,问题还没有解决,就得考虑一下是不是流动相里面是否有杂质了。
可以选择更换流动相或重新配置,这种方式比较快,但可能无法找到根本原因。要特别注意在流动相的配置过程中,是否引入了污染,比如使用了不干净的玻璃器皿什么的,更换溶剂的品牌和批次也是方法之一。
色谱柱长期使用造成的污染有时候也会造成基线波动。有些时候样品里面可能有些保留非常强的组分,可能在色谱柱上很长时间才慢慢被冲出来,这时候已经不是一个峰了,而是基线的干扰或者波动了。为了避免这种问题,在每次进样后,用甲醇或者乙腈长时间冲洗色谱柱。另外,专柱专用也是一个好的习惯,如果一根色谱柱上做很多不同的样品,也可能导致互相之间的污染和影响。
电路的噪音
对于UV检测器来说,就是采样频率不合适而产生的噪音。现在随着超高效液相的普及,检测器的采样频率也越来越高,有的可以达到80Hz以上。
但是如果一味追求高采样频率,可能对灵敏度没有任何帮助,反倒产生比较大的噪音。一般来说,我们需要保证一个色谱峰上面有15-20个点,来保证比较平滑的峰形和比较准确的定量结果。如果一个峰的时间宽度是0.5min,就是是30s,那只要保证1Hz的采样频率就足够了;如果在UPLC上面,一个峰的时间宽度是0.05min,也就是3s,就需要10Hz以上的采样频率,需要根据实际情况和需求来调整检测器的合适的采样频率。
上面从理论到实践,从各个方面分析了液相色谱基线噪音或者波动的来源,以及相应排除方法,希望大家也能够分享自己的经验。
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