培养某一类型细胞没有固定的培养条件，在 MEM 中培养的细胞，很可在 DMEM 中同样很容易生长但是在RPMI-1640 可能就无法生长。
由此可见同一种培养基也会因其成分或添加物的不同而应用于不同的细胞培养和不同的实验需求，下面就详细介绍下培养基中各种添加剂的功能。
1. L-谷氨酰胺(L-Glutamine)在细胞培养中重要吗？它在溶液中不稳定吗？
是细胞生长的必须氨基酸，为培养的细胞提供重要的能量来源。脱掉氨基后，L-谷氨酰胺可作为培养细胞的能量来源、参与蛋白质的合成和核酸代谢。L-谷氨酰胺在溶液中经过一段时间后会降解，降解率随保存温度而变。L-谷氨酰胺的降解导致氨的形成，而氨对于一些细胞具有毒性。
2. GlutaMAX-I是什么？培养细胞如何利用 GlutaMAX-I？这个二肽有多稳定？
GlutaMAX-I 即谷丙氨酸二肽，是一个L-谷氨酰胺的衍生物，其不稳定的 alpha-氨基用L-丙氨酸来保护。一种肽酶逐渐裂解二肽，释放L-谷氨酰胺供利用。GlutaMAX-I 二肽非常稳定，即使在121磅灭菌20分钟，GlutaMAX-I 二肽溶液有最小的降解，如果在相同条件下，L-谷氨酰胺几乎完全降解。
3. 培养基中丙酮酸钠的作用是什么?
丙酮酸钠可以作为细胞培养中的替代碳源，尽管细胞更倾向于以葡萄糖作为碳源，但是，如果没有葡萄糖的话，细胞也可以代谢丙酮酸钠。
4. Hank′s 平衡盐溶液(HBS)和 Earle′s 平衡盐溶液(EBS)有什么本质的功能差别?
HBS 和 EBS 的主要差别在于碳酸氢钠的水平,在 Eagle′s (2.2g/L)中比在 Hanks′ (0.35g/L) 中高。碳酸氢钠需用高水平的 CO2 平衡，以维持溶液的 PH 值。Eagle′s 液在空气水平的CO2中，溶液会变碱，Hanks′液在 CO2 培养箱中会变酸。如果希望在CO2培养箱中保存组织，需要用Eagle′s液，如果仅仅是清洗将要在细胞培养基中储存的组织，用Hanks′液就可以了。
5. 培养液pH对细胞生长的影响?
由于大多数细胞适宜pH为7.2-7.4，偏离此范围可能对细胞生长将产生有害的影响。但各种细胞对pH的要求也不完全相同，原代培养细胞一般对pH变动耐受差，无限细胞系耐受力强。但总体来说，细胞耐酸性比耐碱性强一些。在配制培养用液时，需要注意一点：新配的培养基在经过 0.10um 或 0.22um 滤膜过滤时，溶液的pH 还会向上浮动0.2左右。
6. 培养细胞时应使用5%还是10%CO2，或者根本没有影响?
一般培养基中大都使用 HCO3-/CO32-/H+ 作为pH的缓冲系统，而培养基中NaHCO3的含量将决定细胞培养时应使用的CO2浓度。当培养基中 NaHCO3含量为每公升3.7g时，细胞培养时应使用10% CO2;当培养基中NaHCO3 为每公升1.5g时，则应使用5%CO2培养细胞。
7. Hepes的作用
HEPES溶液：是一种弱酸，中文名字是羟乙基哌秦乙硫磺酸，主要作用是防止培养基pH迅速变动。在开放式培养条件下，观察细胞时培养基脱离了 5%CO2 的环境，CO2 气体迅速逸出，pH迅速升高，若加了HEPES，此时可以维持 pH7.0 左右。一般在进行克隆化培养时要添加HEPES。神经细胞原代培养的过程中能用到。
8. NaHCO3的作用
培养基中使用了 NaHCO3-CO2 缓冲系统，并采用开放培养，使细胞代谢产生的CO2及时溢出培养瓶，再通过稳定调节温箱中CO2浓度(5%)，与培养基中的NaHCO3处于平衡状态，从而调节培养基的PH值。
9. NEAA：非必须氨基酸
NEAA(非必需氨基酸)是含几种非必需氨基酸的合剂，添加到的原培养基不同，NEAA 也有不同的种类，比如添加至MEM的NEAA，含L-Alanine、L-Asparagine、L-Aspartic Acid、 L-Glutamic Acid、L-Glycine、L-Proline、L-Serine。
10. 氯化钙
氯化钙对成骨细胞培养有毒性，所以成骨细胞的培养基中应不含氯化钙。
11. 什么培养基中可以省去加酚红?
酚红在培养基中用作pH值的指示剂：中性时为红色，酸性时为黄色，碱性时为紫色。酚红本身对生物制品质量并不会产生影响，可以通过纯化技术去除，但酚红在无血清培养基可能带来胞内钠/钾失衡，影响细胞生长，当然这种作用能被血清所中和或减轻。酚红并不是培养基中必需的一种成分，很多国外的疫苗或抗体生产企业在生产过程中都使用无酚红培养基。研究表明，酚红可以模拟固醇类激素的作用，(特别是雌激素)。为避免固醇类反应，培养细胞，尤其是哺乳类细胞时，用不加酚红的培养基。由于酚红干扰检测，一些研究人员在做流式细胞检测时，不使用加有酚红的培养基。
12.bFGF 和 EGF
bFGF是一个肝素结合的多肤类丝裂源，广泛分布于各种组织中。bFGF 是一种重要的细胞增殖分化调节剂，可刺激多种细胞的增殖。有研究发现它对滋养细胞也有促增殖作用。bFGF 主要是与细胞膜上FGF受体结合发挥作用，刺激与增殖有关的基因表达。Thomson 等认为，像其他体外培养的人体细胞一样，hES 细胞要求 bFGF 的存在以促进增殖。同理EGF(上皮生长因子), 是人体内的一种活性物质，由53个氨基组成的活细胞，藉由刺激表皮细胞生长因子受体之酪氨酸磷酸化，达到修补增生肌肤表层细胞，据说对受伤、受损之表皮肌肤拥有绝佳之疗效，其最大特点是能够促进细胞的增殖分化。所以加入他们都是促进细胞增殖的。
13.胰岛素（干细胞）
促进蛋白质合成，促进增殖。
14. 无维生素 A 型 B-27 ® 添加剂
是定制的 B-27®添加剂，不含维生素A。维生素A (视黄醇) 能被转化成视黄酸，后者可以诱导干细胞向神经细胞的分化。不含维生素A的配方是干细胞培养的理想选择。添加剂是50x的液体，可以与 Neurobasal®培养基或 Neurobasal®-A 培养基组合使用，用于神经细胞培养而不需要再添加饲养层细胞。
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