昨天刚进实验室的小师妹跑来找小捷。她正想做个新的WB实验，但她刚进实验室还没有自己设计过WB，就来和小捷确认一下protocol。果不其然，师妹不知道该怎么使用抗体，只是模模糊糊地知道抗体需要稀释。可问到要稀释多少倍、用什么稀释，她可就只剩挠头了。
如何确定抗体稀释的比例？
其实要确定抗体的稀释方案并不难！稀释抗体，第一步是要明确使用场景。不同实验所需的抗体浓度不同。您可以在官网中搜索使用的抗体，在“应用”一栏中找到抗体在多种应用中的推荐稀释比例，从这个浓度开始尝试。
但在实际使用中，由于每个实验室的样本来源、诱导方法、实验方案不同，对抗体要求也可能不同，因此最佳抗体浓度有时会和推荐浓度不同。如果是首次使用的抗体，建议在这个比例上下设置几个梯度先用阳性对照实验一下，确定适用您实验条件的抗体浓度。
如何选择抗稀释液？
抗体稀释液，即用于稀释抗体的溶液，在进行抗原抗体反应如WB、ELISA、IF和IHC的实验中，用已经制备的抗体检测样本中的抗原（及其组成成分）。常用的抗体试剂的浓度（效价或滴度）很高，需要稀释合适的倍数后才可以用于检测抗原的试验反应中。传统的抗体稀释液常用的有：
1、脱脂奶粉
脱脂奶粉因便宜量多，一直是实验室的团宠。但因容易发霉变质，每次使用，需要更改新的抗体，不利于抗体的回收和保存；加上遇到溶解不充分和洗涤不干净，容易增加背景、拮抗抗原抗体结合，且不能用于磷酸化蛋白。
2、TBST
TBST 是Tris缓冲液，也是实验室常用的抗体稀释液，效价高的抗体会看到漂亮的条带，效价差的一抗或多抗，会清晰反映出非特异性结合条带，背景高，不能起到降低背景的作用。
3、PBST
PBS是磷酸盐缓冲液，不能用来稀释碱性磷酸酶（AP）标记的抗体，因为磷酸盐会抑制碱性磷酸酶活性。
4、BSA
牛血清白蛋白(BSA) 是牛血清的一种球蛋白。价格较高，一般有条件的实验室使用，BSA能起到封闭效果，减少抗体的非特异性结合。但售卖的BSA通常会有少量的抗体残留，会导致抗原/抗体之间的交叉反应，产生背景。
5、市售的抗体稀释液
市售的抗体稀释液，通常是经过不断优化的BSA，为保证稳定性会增加叠氮钠，但叠氮钠不能用来稀释辣根过氧化酶 (HRP)标记的抗体，因为叠氮钠会抑制HRP的活性，并且还含有毒性，影响人体健康。
捷倍斯生物/GBCBIO生产的 FastBlock Antibody Dilution Buffer(Protein-free)无蛋白通用抗体稀释液（G7255），直接使用，节省时间，实验高效 稀释液中添加了多种抗体保护剂，可以增加抗体的活性和稳定性，减少抗体的非特异性结合，降低非特异性的背景着色，提高试验的特异性和灵敏度。本品不含血清和白蛋白，不会干扰生物素标记或者碱性磷酸酶标记抗体的活性。稀释液处理后的一抗或二抗稀释液可回收于4 ºC保存，多次重复使用，直至不能达到理想结果后丢弃。
特点：
•无蛋白质封——最大限度地减少或消除与基于蛋白质的封闭缓冲液相关的交叉反应
•应用——Western blot、免疫荧光、免疫组化等一抗与二抗的稀释
•兼容性好——不含生物素、联袂亲和素与磷酸根离子；不会干扰HRP或AP标记二抗的检测；不干扰亲和素-生物素检测系统
•高性能——本稀释液不含血清和白蛋白，确保极高的信噪比
产品链接：http://www.genebase.cn/Product/G7255-100ml.html
以NF-κB条带图为例，对比效果：
捷倍斯无蛋白通用抗体稀释液（G7255）与 普通抗体稀释液（TBST）进行对比WB实验
品牌优势
捷倍斯生物可以提供专业和完善的核酸分离纯化解决方案，有硅胶柱法、磁珠法与溶液直接法的核酸纯化产品，在二代测序的样品前处理方面有着专业的技术与积累，有完善的针对唾液、血液与血浆等样品的保存、运输与高通量核酸纯化等整套的解决方案。 在诊断试剂原料方面，捷倍斯生物可以提供生物染色剂、高端的表面活性剂、显色底物、生物缓冲剂以及酶制剂与其稳定剂等系列产品。
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