收藏：8个常用的生物实验技术及原理- 大数跨境

捷倍斯生物

2023-02-03

一、BCA法测蛋白质浓度

实验原理：BCA(bicinchoninic acid，二辛可酸)法测定蛋白质即在碱性条件下蛋白质与Cu2+络合，并将其还原成Cu1+。Cu1+和BCA试剂反应使其由原来的苹果绿形成稳定的紫蓝色复合物，在562 nm有强烈的光吸收，且吸光值和蛋白质浓度在广泛范围内有良好的线性关系，因此可用于蛋白质浓度测定。

二、免疫组化

原理:免疫组织化学，即免疫组化，是应用免疫学基本原理一-抗原抗体反应，即抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂(荧光素、翻、金属离子、同位素)显色来确定组织细胞内抗原《多肽和蛋白质)，对其进行定位、定性及定量的研究。常用于免疫组化实验的有组织石蜡切片、组织冰冻切片、细胞爬片或细胞涂片。

三、RNA提取（Trizol法）

TRNsol试剂中的主要成分为异硫氰酸胍和苯酚，其中异硫氰酸胍可裂解细胞，促使核蛋白体的解离，使RNA与蛋白质分离，并将RNA释放到溶液中。当加入氯仿时，它可抽提酸性的苯酚，而酸性苯酚可促使RNA进入水相，离心后可形成水相层和有机层，这样RNA与仍留在有机相中的蛋白质和DNA分离开。水相层（无色）主要为RNA，有机层（黄色）主要为DNA和蛋白质。

四、RT-PCR

RT-PCR是将RNA的反转录（RT）和cDNA的聚合酶链式扩增（PCR）相结合的技术。首先经反转录酶的作用从RNA合成 cDNA，再以cDNA为模板，扩增合成目的片段。

RT-PCR可以一步法或两步法的形式进行。

在两步法RT-PCR中，每一步都在最佳条件下进行。

实验步骤：

1、RNA的提取；

2、反转录合成cDNA；

3、PCR扩增；

4、产物的电泳和结果的测定。

五、实时荧光定量PCR（Q—PCR）（Real-time Quantitative PCR ）

利用荧光信号的变化实时检测PCR扩增反应中每一个循环扩增产物量的变化，通过Ct值和标准曲线的关系对起始模板进行定量分析。

阈值：是循环开始3～15个循环的荧光信号的标准偏差的10倍，设定在扩增曲线指数增长期。

C(t)值：荧光信号（扩增产物）到达阈值时所经过的扩增循环次数。

六、染色质免疫共沉淀技术（Chromatin Immunoprecipitation，ChIP）

基本原理：在生理状态下把细胞内的DNA与蛋白质交联在一起，通过超声或酶处理将染色质切为小片段后，利用抗原抗体的特异性识别反应，将与目的蛋白相结合的DNA片段沉淀下来。染色质免疫沉淀技术一般包括细胞固定，染色质断裂，染色质免疫沉淀，交联反应的逆转，DNA的纯化及鉴定。

ChIP是研究体内蛋白质与DNA相互作用的有力工具，利用该技术不仅可以检测体内反式因子与DNA的动态作用，还可以用来研究组蛋白的各种共价修饰以及转录因子与基因表达的关系。

七、大肠杆菌感受态细胞（E.coli DH5α）制备

1、前夜接种受体菌（DH5或DH10B），挑取单菌落于LB培养基中37℃摇床培养过夜（约16小时）；

2、取1ml过夜培养物转接于100ml LB培养基中，在37℃摇床上剧烈振荡培养约2.5-3小时（250-300rpm）；

3、将0.1M CaCl2溶液置于冰上预冷；以下步骤需在超净工作台和冰上操作；

4、吸取1.5ml培养好的菌液至1.5ml离心管中，在冰上冷却10分钟；

5、4℃下3000 g冷冻离心5分钟；

6、弃去上清，加入100微升预冷0.1M CaCl2溶液，用移液枪轻轻上下吸动打匀，使细胞重新悬浮，在冰放置20分钟；

7 、4℃下3000 g冷冻离心5分钟；

8 、弃去上清，加入100微升预冷0.1M CaCl2溶液，用移液枪轻轻上下吸动打匀，使细胞重新悬浮；

9 、细胞悬浮液可立即用于转化实验或添加冷冻保护剂（15% - 20%甘油）后超低温冷冻贮存备用（－70℃）。

八、碱变性提取质粒DNA

碱变性提取质粒DNA是基于染色体DNA与质粒DNA的变性与复性的差异而达到分离目的。在pH=12.6的碱性条件下，染色体DNA的氢键断裂，双螺旋结构解开而变性。质粒DNA的大部分氢键也断裂，但超螺旋共价闭合环状的两条互补链不会完全分离，当用pH4.8的NaAc高盐缓冲液去调节其pH至中性时，变性的质粒DNA又恢复原来的构型，保存在溶液中，而染色体DNA不能复性而形成缠连的网状结构，通过离心，染色体DNA与不稳定的大分子RNA、蛋白质-SDS复合物等一起沉淀下来而被除去。

实验所需试剂

货号	试剂名称-(GBCBIO)
G3522	BCA蛋白浓度测定试剂盒\|BCA Protein Assay Kit
G3155	Bradford蛋白浓度测定试剂盒\|Bradford Protein Assay Kit
R1106	TRNsol/TRNsol RNA提取试剂‍‍
G3470	电泳缓冲液10 x Tris-MES-SDS Running Buffer
G4566	Tris-乙酸-EDTA缓冲液\|50XTAE
0288	氯化镁 \| Magnesium Chloride, Hexahydrate
M3705	DNA分子标准物DNA Marker IV\|DNA Marker IV
G4550	6XDNA上样缓冲液\|6XDNA Loading Buffer
P3411	DNA扩增2xPCRmix Master\|2xPCRmix Master

1.捷倍斯生物官网

2.知乎《收藏|史上最全的30个生物实验技术及原理》

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GBCBIO --自主品牌--物美价廉-- 服务优质

广州捷倍斯生物科技有限公司(GBCBIO Technologies)专注于生物试剂与诊断原料的研发、生产与销售，致力于提高国产生物试剂的竞争力。自主品牌----GBCBIO®牌核酸纯化试剂盒、ECL发光液、蛋白定量试剂盒与高端的表面活性剂等已为广大的科研与工业用户所使用，产品达到同类进口品牌的品质，具有物美价廉的特点！

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