临床工作中，基因组DNA提取常用的离体标本包括血液、器官组织和脱落细胞，其中血液样本使用最为广泛。
一 全血DNA提取的原理
全血是指未经任何处理的血液样本，包括了血液中的所有组成部分：红细胞、白细胞、血小板以及血浆。全血通常用于临床检测、血液学的研究以及输血等方面。在全血中，血细胞和血浆保持着自然的比例和状态。
核酸类型：全血中包含了细胞和血浆中的核酸，包括细胞基因组DNA、细胞内RNA以及血浆中的游离DNA和RNA。
处理步骤：提取全血核酸时，通常需要先对血液进行裂解和溶解，使细胞内的核酸释放到溶液中，然后再进行纯化和提取。
难点：血液中含有丰富的蛋白质糖类、脂质，这些物质供给了人们所需的营养，但是无形中干扰了血液核酸提取的纯度。
全血血浆、白细胞、血小板、红细胞组分及所在位
首先，将全血样本进行离心，以分离血液中的红血细胞(RBCS)、白血细胞(WBCS)和血小板。离心后，上清液中含有RBCS和WBCS混合的细胞组分。血样各种成分中，只有白细胞含有DNA。
其次，采用红细胞裂解缓冲液，使RBCS在牺牲细胞膜完整性的同时释放出细胞内的血红素。血红素会结合到缓冲液中的成分上，从而不会对后续DNA提取步骤产生干扰。
然后，WBCS的核酸膜被洗涤和蛋白酶降解，以去除表面的蛋白质和杂质。随后，用组织裂解缓冲液处理细胞，以破坏细胞膜结构，释放出细胞内的DNA，此时液体中包含DNA、大量蛋白、RNA、盐类、微量血红素。
二 全血DNA样本的采集保存
用含抗凝剂的采血管进行采血，抗凝剂一般有EDTA和肝素，EDTA更好一些，不会影响下游的反应，如果没有采血管，也可以自己添加抗凝剂EDTA，提前准备0.04M的EDTA溶液，每5ml的血液中加入0.4ml配好的EDTA溶液，颠倒混匀即可。保存于-20℃至-80℃，一般2-3年内均可以提取，保存时间越短，提取的质量越高，最好在2个月内提取。
三 全血DNA的提取方法
全血提取试剂盒一般有离心柱和磁珠法两种。一般来说，离心柱的提取纯度高一些，但是样本处理方法比较繁琐，全程需人工操作，耗时长；磁珠法可以进行自动化的提取，省去了大量的时间人工操作，血液标本一般在2ml以上，选择磁珠法的方法提取。
捷倍斯生物公司的 GBCBIO® 快速磁珠法血液DNA提取试剂盒(M3115) Fast MagIso Blood DNA Isolation Kit 的是专门为华大智造、KingFisher, 达安、天隆等核酸提取仪设计的产品，适合于从200µl的全血中提取核酸。具有独特分离作用的磁珠和独特的缓冲液系统，从100 μl-1 ml血液中分离纯化高质量基因组DNA。纯化的DNA可适用于各种常规操作，包括酶切、PCR、荧光定量PCR、文库构建、Southern杂交，芯片检测、高通量测序等实验。
产品特点
简便快捷：1 h内即可获得超纯的基因组DNA。
高通量：可整合移液法自动化仪器和磁棒法自动化仪器进行高通量提取实验
安全无毒：无需酚/氯仿等有机试剂
纯度高：获得的DNA纯度高，可直接用于芯片检测、高通量测序等实验
快捷：裂解液具有结合液功能，无需额外添加结合液
四 血液DNA的提取步骤
提 取 流 程A（以GBCBIO-M3115为例）: 200µl 样品的手工操作流程
该方案采用手工操作流程，适合于从200µl全血中提取核酸。自动方案根据不同的机器匹配相应的程序即可。
1. 在1.5ml离心管中，加入20µl Proteinase K、25µl MagIso Beads和400µl Bufer MTL。
注：根据样品的个数，可预先将Proteinase K、磁珠与Buffer MTL按比例混匀，以减少加液的次数，预混后每样加445µl预混液。
2. 转移200µl全血至含蛋白酶K的离心管中。
3.涡旋混匀15秒。65℃放置10分钟，其间颠倒混匀次数。
4.室温放置3-5分钟。
5.转移至磁力架上，静置3~5分钟吸附磁珠。小心吸弃溶液。
6.加入600ul Buffer MW1，涡旋混匀。（如果离心管盖等比较多裂解液残留，可将重悬液转置于新的离心管中）
7.转移至磁力架上，静置2分钟吸附磁珠。小心吸弃溶液。
8.加入700ul 75%乙醇，涡旋混匀15秒。
9.转移至磁力架上，静置2分钟吸附磁珠。小心吸弃溶液。
10.重复第8-9步一次。
11. 空气干燥7~10分钟。
注意：乙醇残留会抑制后续的酶反应，所以晾干时要确保乙醇挥发干净。但也不要干燥 太长时间，以免难以洗脱DNA。
12. 加50~100µl 预热至55oC的Buffer TE或灭菌水等缓冲液，涡旋打散磁珠。静置3~5分钟，其间轻轻振荡1~2次加速DNA溶解。
转移至磁力架上，静置3分钟。转移DNA溶液至新的1.5ml离心管中。
| 货号 | 产品名称 |
|---|---|
| D1105 | Blood DNA Kit 血液DNA提取试剂盒 |
| D1115 | Blood Clot DNA Kit 血凝块DNA提取试剂盒 |
| D1305 | Blood DNA Maxi Kit 血液DNA大量提取试剂盒 |
| M3115 | Fast MagIso Blood DNA Isolation Kit 快速磁珠法血液DNA提取试剂盒 |
产品介绍:
https://www.gbcbio.cn/Product/D1105.html
https://www.gbcbio.cn/Product/D1115.html
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A260/280 >2.1 RNA污染; -
A260/280 一般在1.8-2.1，DNA提纯效果好; -
A260/280 <1.8 盐、无机物污染; -
A260/230 >2.0 DNA提纯效果较好; -
A260/230 <2.0 存在盐离子、多肽、碳水化合物等污染。
可以通过琼脂糖凝胶结果判断提取的DNA是否有RNA、蛋白质、糖酚或者代谢物质等残留。另外，提取基因组DNA时通过条带是否单一明亮来判断DNA的完整度。凝胶电泳法可以通过片段亮度与DNA marker比较，粗略判断提取的DNA浓度高低。
六 全血DNA提取实验注意事项
DNA提取过程中，操作人员需穿戴实验服、口罩和手套，实验所需枪头、EP管等实验耗材需经高压灭菌消毒，并提前预热水浴锅和恒温箱。
血清分离时,操作人员动作要缓慢,操作时尽可能抽净上层血清,保留中间层的白细胞和下层的红细胞,初学者操作时不可过分追求吸净上层血清,以免将中间的白细胞层吸走而影响DNA提取。
在实验操作过程中，使用移液器吸取试剂时不要把移液器枪头伸入液体过多，以刚刚没入液面为宜,保证能吸到液体即可，避免造成浪费。PCR实验精度较高，加入试剂量多为微升计，如移液器枪头伸入试剂过多，粘附于枪头的试剂就会较多，会导致实验试剂的极大浪费。
品牌优势
捷倍斯生物可以提供专业和完善的核酸分离纯化解决方案，有硅胶柱法、磁珠法与溶液直接法的核酸纯化产品，在二代测序的样品前处理方面有着专业的技术与积累，有完善的针对唾液、血液与血浆等样品的保存、运输与高通量核酸纯化等整套的解决方案。 在诊断试剂原料方面，捷倍斯生物可以提供生物染色剂、高端的表面活性剂、显色底物、生物缓冲剂以及酶制剂与其稳定剂等系列产品。
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