现代分子生物学和免疫学的进展加深了我们对许多疾病的了解,并且导致了免疫新策略的产生,免疫学检测方法可分为体液免疫和细胞免疫测定。本文介绍免疫学常见的几种分子生物学实验技术。
图片源自@NIAID
IP 免疫沉淀技术是以抗体和抗原之间的专一性作用为基础,用于研究蛋白质相互作用、或者蛋白质与遗传物质之间相互作用的经典方法
2.1、CHIP:染色质免疫沉淀(chromatin immunoprecipitation,ChIP)
研究体内DNA-蛋白质相互作用的分析手段。在生理状态下把细胞内的DNA与蛋白质交联在一起,超声破碎将染色质随机切断为一定长度范围内的染色质片段,用所要研究的目的蛋白的特异性抗体沉淀交联复合体,再经过蛋白质与DNA 解除偶联,纯化目的片段并检测。
2.2、RIP:RNA结合蛋白免疫沉淀(RNA Binding Protein Immunoprecipitation)
研究细胞内RNA与蛋白结合情况的技术。用抗体或表位标记物捕获细胞核内或细胞质中内源性的RNA结合蛋白,防止非特异性的RNA的结合,免疫沉淀把RNA结合蛋白及其结合的RNA一起分离出来,结合的RNA序列通过microarray(RIP-Chip),定量RT-PCR或高通量测序(RIP-Seq)方法来鉴定。
2.3、Co-IP:免疫共沉淀(co-inmunoprecipitation)
利用抗体从样品中捕获靶蛋白及其互作蛋白、复合体的一项技术,能够特异性富集所研究的目的蛋白。由于过程中采用了非变性条件,保留了互作及复合体的细胞内状态。相对于酵母双杂交、pull down等方法,其特色之一便是捕获的蛋白互作发生在所研究的特定组织细胞内,保存了互作蛋白及复合体的“内源”状态。
IHC免疫组化是应用抗原抗体特异性反应原理,通过化学反应使标记抗体的显色剂(荧光素、酶、金属离子、同位素)显色来确定组织细胞内抗原(多肽和蛋白质),对其进行定位、定性及相对定量的研究。
IF 免疫荧光技术是将不影响抗原抗体活性的荧光色素标记在抗体(或抗原)上,与其相应的抗原(或抗体)结合后,在荧光显微镜下呈现一种特异性荧光反应。1、IF-IC 细胞免疫荧光 2、IF-F石蜡切片免疫荧光 3、IF-P 冰冻切片免疫荧光。
FCM流式细胞术用于对悬浮于流体中的微小颗粒进行计数和分选。这种技术可以用来对流过光学或电子检测器的一个个细胞进行连续的多种参数分析。流式细胞术是对悬液中的单细胞或其他生物粒子,通过检测标记的荧光信号,实现高速、逐一的细胞定量分析和分选的技术。
MACS 磁性活化细胞分选法用结合了磁珠的抗体去标记细胞,让目的细胞带上磁珠,通过磁场将结合了磁珠与没结合磁珠的细胞分离开来。MACS是细胞分选的重要手段,设备简单,只需要一块磁铁,不需要专门的大型仪器,得到的细胞活性好,适合大多数的实验室。缺点就是能分选的细胞类型有限。
FACS流式荧光激活细胞分选术原理与流式分析一致,利用荧光素标记不同的分子,通过调节合适的电压、补偿等,通过荧光将目的细胞与非目的细胞区分开来。
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