5种RNA 提取方法对比- 大数跨境

捷倍斯生物

2025-09-26

导读：人体一个细胞含RNA约10pg（含DNA约7pg）。在细胞中，根据结构功能的不同，RNA主要分三类，即tRNA（转运RNA），rRNA（核糖体RNA），mRNA（信使RNA）。mRNA含量低，占细胞总

一 RNA有哪些种类？

人体一个细胞含RNA约10pg（含DNA约7pg）。在细胞中，根据结构功能的不同，RNA主要分三类，即tRNA（转运RNA），rRNA（核糖体RNA），mRNA（信使RNA）。mRNA含量低，占细胞总RNA的1%~5%。核糖体RNA特点含量高，占细胞总RNA的80%~85%。

表1.RNA的结构和功能

种类	结构	功能
mRNA	短的、不稳定的、单链的RNA，对应于DNA中编码的基因	mRNA是合成蛋白质的模板，内容按照细胞核中的DNA所转录
rRNA	更长、更稳定的RNA分子，占核糖体质量的60%	rRNA是组成核糖体的组分，是蛋白质合成的工作场所。
tRNA	短的（70-90个核苷酸），稳定的RNA，具有碱基配对功能;包含一个氨基酸结合位点和一个 mRNA 结合位点	tRNA是mRNA上碱基序列（即遗传密码子）的识别者和氨基酸的转运者

随着高通量组学技术的应用，在高等哺乳动物中已发现高达数十万种非编码RNA，根据结构与功能可对其进行科学分类和系统命名，如tRNA、rRNA、snRNA、snoRNA、siRNA、miRNA、piRNA和lncRNA等。非编码RNA是当今生命科学发展最为迅速的前沿领域之一，它不断更新人们对生命本质的认识，为生物遗传育种及人类重大疾病的干预、防治和药物研究等提供全新的思路与技术。

单链的RNA螺旋结构

图源：ADOBE

RNA研究的第一步为RNA提取，高质量的RNA是进行转录组测序、RT-PCR等试验的基础，然而由于RNA单链结构的不稳定性和无处不在的RNA酶，使得RNA在提取过程中容易发生降解，同时，传统的RNA提取方法毒性大，因此，提取出高质量的RNA，选择合适的提取产品非常重要！

二 RNA提取有哪些方法？

一、酚 - 氯仿法（经典有机相提取法）

适用场景

各类样本（动物细胞 / 组织、细菌、酵母），尤其适合 RNA 产量较低或需要同时提取 DNA、蛋白质的实验（“三位一体” 提取）。

核心原理

利用有机相（酚 - 氯仿）与水相的密度差异，通过离心实现 RNA、DNA、蛋白质的分层分离，同时结合 RNase 抑制剂保护 RNA：

优缺点

优点：成本低、适用范围广，可同时分离 RNA、DNA、蛋白质；

缺点：操作繁琐（需多次离心、移液），酚 / 氯仿有刺激性和毒性，易导致 RNA 残留污染。

二、胍盐 - 硅胶柱法（柱式提取法，目前最常用）

适用场景

几乎所有样本（动物、植物、细菌、病毒、血液等），尤其适合需要快速、高效提取高质量 RNA 的实验（如 RT-PCR、RNA-seq），是商业化 RNA 提取试剂盒的核心技术。

核心原理

基于胍盐变性 + 硅胶柱特异性吸附 RNA 的双重机制，实现 RNA 的快速纯化：

优缺点

优点：操作简便（30-60 分钟完成）、RNA 纯度高（无 DNA / 蛋白质污染）、重复性好，适合批量样本处理；

缺点：成本较高（依赖试剂盒），硅胶柱对 RNA 的吸附有上限（不适合超大量样本）。

三、TRNsol 法（改良酚 - 氯仿法，商业化试剂盒常用）

适用场景

动物细胞 / 组织、植物组织（尤其含多糖较少的样本）、细菌，是实验室提取总 RNA 的 “金标准” 之一。

核心原理

TRNsol 是一种预混裂解液（主要成分：异硫氰酸胍、酚、β- 巯基乙醇、柠檬酸钠），通过 “一步裂解 + 分层分离” 实现 RNA 纯化，原理本质是改良的酚 - 氯仿法，但优化了试剂配比，降低操作复杂度：

优缺点

优点：操作相对简便（一步裂解），RNA 回收率高（尤其适合少量样本），可有效去除蛋白质和脂质污染；

缺点：酚有刺激性，处理植物样本（含大量多糖、多酚）时易出现 RNA 沉淀浑浊（需额外加糖原辅助沉淀）。

Total RNA Kit 总RNA提取试剂盒（GBCBIO-R4105）是基于一步法的改良产品，提高了裂解液的裂解能力和提取的灵敏度，同时对硅基质膜的改进增强了对RNA的吸附能力，得到的RNA 纯度更好，质量更高。该试剂盒可从各种细胞或组织中快速提取总RNA，每个吸附柱每次可处理50-100 mg 组织或5×10⁶ 细胞，可同时处理大量不同样品。一个小时内即可完成反应，提取的总RNA 没有DNA 和蛋白的污染，可用于Northern blot、Dot blot、polyA 筛选、体外翻译、RNase 保护分析和分子克隆。

四、磁珠法（自动化提取首选）

适用场景

微量样本（如单细胞、血液、体液）、批量样本自动化提取（如临床检测、高通量测序），尤其适合对纯度要求极高的实验（如单细胞 RNA-seq）。

核心原理

利用表面修饰的磁性微球（磁珠）特异性结合 RNA，通过磁场控制磁珠的分离与洗涤，实现 RNA 纯化：

优缺点

优点：无离心操作（减少 RNA 损失）、自动化程度高（可适配 96 孔板）、RNA 纯度极高（适合微量样本）；

缺点：成本高（磁珠试剂昂贵），对样本中杂质（如腐殖酸、多糖）敏感（需提前预处理样本）。

MagIso DNA/RNA Isolation Kit 磁珠法DNA/RNA提取试剂盒（GBCBIO-M6105）采用具有独特分离作用的磁珠和独特的缓冲液系统，能适合于从血浆、无细胞体液、病毒原液和组织中提取RNA/DNA 的小量纯化试剂盒。试剂盒基于超顺磁性的磁性粒子纯化技术，可最大程度减少交叉污染的风险，提高检测的灵敏度和准确度，尤其适合高通量工作站的自动化提取。

五、CTAB 法（植物样本专用）

适用场景

植物组织（尤其含大量多糖、多酚、色素的样本，如叶片、果实、根茎）—— 常规方法（如 TRNsol）易受植物多糖干扰，导致 RNA 沉淀结块，而 CTAB 可有效去除多糖。

核心原理

CTAB（十六烷基三甲基溴化铵）是一种阳离子表面活性剂，可特异性结合多糖，同时裂解细胞并保护 RNA：

优缺点

优点：专门针对植物多糖、多酚污染，RNA 回收率高；

缺点：操作步骤多（需多次去多糖），耗时较长（约 4-6 小时）。

三 RNA提取方法对比

提取方法	核心原理	适用样本	优点	缺点
酚 - 氯仿法	有机相分层分离	各类样本（通用）	成本低，可同时提 DNA / 蛋白质	操作繁琐，酚 / 氯仿有毒
胍盐 - 硅胶柱法	硅胶柱特异性吸附 RNA	几乎所有样本（常用）	简便、纯度高、重复性好	成本高
TRNsol 法	改良酚 - 氯仿一步裂解	动物 / 细菌 / 低多糖植物	回收率高，操作较简便	酚有刺激，不适合高多糖植物
磁珠法	磁珠特异性结合 + 磁场分离	微量样本、自动化提取	无离心、纯度极高、自动化	成本高，对杂质敏感
CTAB 法	CTAB 去除多糖 + LiCl 沉淀 RNA	高多糖 / 多酚植物样本	针对性去多糖，回收率高	步骤多、耗时久

选择 RNA 提取方法时，需优先根据样本类型（植物 / 动物 / 微生物）、样本量（微量 / 大量）、后续实验需求（纯度 / 产量） 综合判断，同时全程注意 “无 RNase 操作”（如使用无 RNase 耗材、加 RNase 抑制剂），避免 RNA 降解。

四 RNA提取有哪些注意事项？

全程无 RNase 操作：

耗材：枪头、离心管、匀浆器需用 0.1% DEPC 水浸泡过夜，121℃灭菌 30 分钟（DEPC 高温分解，无残留）；

试剂：所有水和缓冲液需用无 RNase 水配制，关键试剂（如洗脱液）可加 RNase 抑制剂（如 RNasin，终浓度 40U/mL）；

操作：戴一次性无粉手套（避免手上 RNase 污染），避免说话时对着样本呼气（唾液含 RNase），若试剂洒到操作台，用 75% 乙醇擦拭消毒（灭活 RNase）。

RNA 质量检测：

纯度：用 Nanodrop 检测 A260/A280 比值（1.8-2.0 为合格，＜1.8 说明有蛋白质污染，＞2.0 说明有 RNA 降解）；

完整性：用琼脂糖凝胶电泳检测（真核生物总 RNA 应清晰显示 28S 和 18S 条带，且 28S 亮度约为 18S 的 2 倍，无弥散带说明无降解）。

RNA 保存：

短期（1 周内）：-20℃保存（加 RNase 抑制剂）；

长期（数月至数年）：-80℃保存（分装成小体积，避免反复冻融，反复冻融会导致 RNA 断裂）；

避免反复冻融：首次溶解后按单次实验用量分装（如 10μL / 管），分装后立即放回 - 80℃。

捷倍斯生物生产的RNA组织保存液 RNAlocker（ GBCBIO® -R9101），随时随地取样；放进保存液，即可保存运输，无需液氮，干冰；保存的样本可反复冻融，RNA的提取完整性和数量不受影响，可以保证RNA和蛋白不降解! 可广泛应用于多种脊椎动物样本,包括脑、心、肾、脾、肝、肺和胸腺等动植物组织，以及细胞、细菌、血液中等有核细胞的保存。RNAlocker 一种水相的，无毒的组织保存液体，可以迅速渗入新鲜组织细胞的胞浆中，在非冻状态下原位稳定和保护细胞内的RNA。

推荐使用的产品

样品类型	推荐试剂（品牌+货号）
通用	RNAlocker (GBCBIO-R9101)
通用	TRNsol/TRNsol（GBCBIO-R1106） TRNsol LS Reagent（GBCBIO-R1606）
哺乳动物组织	Tissue RNA Kit（GBCBIO-R3105） FFPE RNA Kit（GBCBIO-R7105） miRNA Isolation Kit（GBCBIO-R8015）
哺乳动物组织	Total RNA Kit（GBCBIO-R4105）
植物	Plant RNA Kit（GBCBIO-D5105） Plant RNAplus(溶液法）（GBCBIO-D5105）
真菌	Fungal RNA Kit（GBCBIO-D6105）
细菌	Bacterial RNA Kit（GBCBIO-R1405）

产品介绍：

RNAlocker：http://www.gbcbio.cn/Product/R9101.html

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品牌优势

GBCBIO --自主品牌--物美价廉-- 服务优质

广州捷倍斯生物科技有限公司(GBCBIO Technologies)专注于生物试剂与诊断原料的研发、生产与销售，致力于提高国产生物试剂的竞争力。自主品牌----GBCBIO®牌核酸纯化试剂盒、ECL发光液、蛋白定量试剂盒与高端的表面活性剂等已为广大的科研与工业用户所使用，产品达到同类进口品牌的品质，具有物美价廉的特点！

捷倍斯生物可以提供专业和完善的核酸分离纯化解决方案，有硅胶柱法、磁珠法与溶液直接法的核酸纯化产品，在二代测序的样品前处理方面有着专业的技术与积累，有完善的针对唾液、血液与血浆等样品的保存、运输与高通量核酸纯化等整套的解决方案。在诊断试剂原料方面，捷倍斯生物可以提供生物染色剂、高端的表面活性剂、显色底物、生物缓冲剂以及酶制剂与其稳定剂等系列产品。

视质量如生命的我们，以“做值得交往的人，做值得信赖的产品”为信念，期望通过我们努力的能够为您提供优质的产品与贴心的服务。

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