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4种PCR产物纯化方法对比

捷倍斯生物

2024-08-22

一、产物直接纯化

PCR扩增完成后需要进行琼脂糖凝胶电泳检测，在条带单一无其他杂带的情况下，可以直接对产物进行纯化，常见的纯化方法有：

1、硅胶层析柱法

原理：大多数离心柱中吸附DNA的是一层硅胶膜，实际上就是一层玻璃纤维，其表面有大量修饰的硅羟基（Si-OH），硅羟基在溶液中解离后带负电，然后与带正电盐离子、带负电DNA形成电桥，从而吸附住DNA，使得DNA双链变单链，不会被生物大分子溶剂洗脱，但能经水溶性缓冲液水化后，被定量回收，从而实现纯化分离。

图1 硅胶层析原理示意图

图源：absin

图2 硅胶层析流程简图

图源：百度

GBCBIO® C2105-PCR/酶切产物纯化试剂盒 DNA-Pure Kit 采用独特的离心吸附柱纯化酶切、PCR等反应溶液中的DNA片段，同时除去蛋白质、其它有机化合物、无机盐离子及寡核苷酸引物等杂质。本试剂盒适用于回收100 bp–40 kb ，起始量为1-5 μg的DNA片段，回收率可达80%以上（<100 bp 或>10kb 的DNA片段回收率为30－50%）。使用本试剂盒回收的DNA 可适用于各种常规操作，包括酶切、PCR、测序、文库筛选、连接和转化等实验。

推荐使用的产品

货号	产品名称
C2105	PCR/酶切产物纯化试剂盒 DNA-Pure Kit

产品介绍：

http://www.gbcbio.cn/Product/C2105.html

2、磁珠法

原理：磁珠是有磁性的能吸附DNA的物质，其内部核心是铁离子，在磁场作用下可以吸附在磁体上。在核心外，经过羧化，带有羧基基团，在特定的离子条件下，可以与DNA结合。结合后，在外磁场的作用下，磁珠与DNA结合体移动到磁体周围，可以很方便去除其他多余的液体，这时，不能与磁珠结合的所有杂质都随水溶液一并去除。然后，在洗脱条件下，DNA与磁珠分离，溶解在水中，将溶解有DNA的溶液转移，就得到了纯化后的DNA样本。

图3 磁珠法结构示意图

图源：absin

图4 磁珠法纯化DNA流程简图

图源：absin

GBCBIO® R1205-病毒DNA-RNA纯化试剂盒 Virus DNA-RNA Isolation Kit 试剂盒是专门用于从血浆、无细胞体液、病毒原液和感染病毒的组织中提取各种病毒（Virus）RNA/DNA 的小量纯化试剂盒。试剂盒采用了独特的病毒裂解系统，由病毒裂解液裂解病毒释放 RNA 或DNA，再结合核酸制备膜技术纯化 RNA 或 DNA，适用于各种 RNA 或 DNA 病毒的核酸提取。本试剂盒具有高效、快速、方便之特点，病毒裂解后，提取操作仅需 20 分钟便可完成。本试剂盒配有 Carrier RNA可提取样品中微量的 RNA/DNA，提取得到的 RNA 可用于RT-PCR 反应、Northern 杂交等多种分子生物学实验。

推荐使用的产品

货号	产品名称
R1205	病毒DNA-RNA纯化试剂盒 Virus DNA-RNA Isolation Kit

产品介绍：

http://www.gbcbio.cn/Product/R1205.html

3、其他纯化方法

①渗透液结合醇沉纯化

原理：利用分子大小不同，小分子的物质能够通过渗透膜溶解到大量的溶液中去，而大分子的物质不能通过渗透膜，所以继续留存在透析袋中，通过乙醇沉淀最后达到去除小分子物质，得到纯化的有机大分子的效果。

②直接沉淀纯化

原理：DNA分子在高盐离子醇溶液中会被沉淀出来，而其他物质继续溶液在溶液中，沉淀出来的DNA分子经过离心与溶液成分分开，达到纯化的目的。

不同纯化方法对比

纯化方法	硅胶层析柱法	磁珠法	渗透液纯化	沉淀纯化
纯化介质	硅胶膜	磁珠	渗透膜	乙醇/异丙醇
优势	操作简便、快速、安全，产物纯度高随时用于下游实验	产物纯度高；通量高，可实现自动化；操作简便、快速、安全；高灵敏度	样本处理体积灵活，产量高，成本低
劣势	存在堵柱风险；对样本起始量有限制；难以实现自动化操作，大批量处理费时费力；小于100bp的DNA片段难以吸附	需要搭配磁力架或者仪器使用，成本较高；部分DNA难以被抓取导致回收率低；小于100bp的DNA片段难以吸附	安全性低，无法进行高通量提取、纯度较低
选择依据	样本起始量较充足，但数量不多，需要操作简便省时，且提取出的DNA能用于绝大多数下游实验的实验室	下游需要高纯度的DNA，需要大批量处理，能够支持自动化提取的实验室	时间充足，样本量充足，想节省成本的实验室

二、凝胶回收纯化

如电泳检测结果存在非特异性条带，则需要将目的条带切出来，再用胶回收试剂盒对凝胶进行回收纯化，相较于直接纯化，只是多了一步溶胶的过程，相应的产物纯度提高，回收率则下降。

GBCBIO® C1105-琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒 Gel Extraction Kit 适合于从各种浓度各种类型的琼脂糖凝胶中回收100bp-20Kb的DNA片段，回收效率高达85%。纯化过程不需要用到任何危险的有机物抽提或耗时的乙醇，异丙醇沉淀。纯化产物可直接用于做连接、PCR、测序、限制性酶切，或者各种各样的标记反应。该试剂盒也适合于从酶切产物，PCR产物中高效回收DNA。产物纯化操作可参考4种DNA RNA纯化方法介绍（附操作步骤及优缺点）

推荐使用的产品

货号	产品名称
C1105	琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒 Gel Extraction Kit
C5105	聚丙烯酰胺凝胶DNA回收试剂盒 PolyGel DNA Extraction Kit

产品介绍：

http://www.gbcbio.cn/Product/C1105.html

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GBCBIO --自主品牌--物美价廉-- 服务优质

广州捷倍斯生物科技有限公司(GBCBIO Technologies)专注于生物试剂与诊断原料的研发、生产与销售，致力于提高国产生物试剂的竞争力。自主品牌----GBCBIO®牌核酸纯化试剂盒、ECL发光液、蛋白定量试剂盒与高端的表面活性剂等已为广大的科研与工业用户所使用，产品达到同类进口品牌的品质，具有物美价廉的特点！

捷倍斯生物可以提供专业和完善的核酸分离纯化解决方案，有硅胶柱法、磁珠法与溶液直接法的核酸纯化产品，在二代测序的样品前处理方面有着专业的技术与积累，有完善的针对唾液、血液与血浆等样品的保存、运输与高通量核酸纯化等整套的解决方案。在诊断试剂原料方面，捷倍斯生物可以提供生物染色剂、高端的表面活性剂、显色底物、生物缓冲剂以及酶制剂与其稳定剂等系列产品。

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