昆虫种类繁多,世界上已记录的昆虫有100多万种(其中有害昆虫八万余种),是目前最大的未被充分利用的宝贵资源。昆虫是动物界中最大的一个类群,在所有生物种类中占比超过50%,它们的踪迹几乎遍布世界的每一个角落。
有研究认为昆虫最早起源于奥陶纪,现存的昆虫谱系大多起源于密稳纪,而昆虫主要的多样性分化则出现在白垩纪时代。
蜻蜓的起源可以追溯到约3.2亿年前最早的蜻蜓化石在二叠纪
图源:六图网
一. 常见的昆虫有哪些?
对人类健康危害最大的昆虫——蚊
蚊子属于双翅目蚊科,世界上约有3000种。是一种具有刺吸式口器的纤小飞虫。通常雌蚊以血液作为食物,而雄蚊则吸食植物的汁液。吸血的雌蚊是登革热、疟疾、黄热病、丝虫病、日本脑炎等其他病原体的中间寄主。蚊子的分布极为广泛,除南极洲外各大洲皆有蚊子的分布。其中,以按蚊属、伊蚊属和库蚊属最为著名。
相关研究▕疟疾载体——达氏按蚊的基因组研究[2]
按蚊是最主要的疟疾传播载体,在美洲每年由按蚊引起的疟疾有数百万例。
对农业危害最大的昆虫——蝗虫
蝗虫属直翅目,全世界有超过10,000种,广泛分布于热带、温带的草地和沙漠地区。蝗虫主要包括飞蝗和土蝗。在我国飞蝗有东亚飞蝗、亚洲飞蝗和西藏飞蝗3种,其中东亚飞蝗在我国分布范围最广,危害最严重,是造成我国蝗灾的最主要飞蝗种类,主要危害禾本科植物。全世界常年发生蝗虫的面积达4,680万km2,全球1/8的人口经常受到蝗灾的袭扰。
相关研究▕ 基因组信息揭示蝗虫与飞行和植食性相关的基因家族扩张[3]
在目前已完成测序的昆虫基因组中,最大的为东亚飞蝗,别看它身材小巧,基因组却高达6.5Gb,是人类基因组的2倍。研究发现东亚飞蝗基因组中存在大量的重复序列(至少60%),且这些序列的丢失频率明显比其他昆虫少很多,这是造成其庞大基因组的主要原因。
最浪漫的昆虫——萤火虫
萤火虫属鞘翅目萤科,是一种小型甲虫。因其尾部能发出荧光,故名为萤火虫。全世界约2000种,分布于热带、亚热带和温带地区,我国较常见的有黑萤、姬红萤、窗胸萤等几种。
萤火虫可以利用荧光的闪烁节奏形成特定的闪光信号,主要用来吸引异性交尾,偶尔也起一定的警戒作用。这种行为与蟋蟀鸣叫,蝴蝶起舞等类似,都可归为求偶行为,因为场面过于浪漫,被人们赋予更多诗意。
对遗传学研究贡献最大的昆虫——果蝇
果蝇广泛地存在于全球温带及热带气候区,目前发现有至少1000种,在人类的栖息地内如果园,菜市场等地区内皆可见其踪迹。
果蝇只有四对染色体,数量少而且形状有明显差别;果蝇性状变异很多,比如眼睛的颜色、翅膀的形状等性状都有多种变异,这些特点对遗传学研究也有很大好处,是很常用的遗传学研究材料。
相关研究▕ 低覆盖长读测序法快速组装果蝇参考基因组[5]
最顽强的昆虫——蟑螂
蟑螂是属于蜚蠊目的昆虫,世界上约有6000种,主要分布在热带和亚热带地区。少数蟑螂会入侵人类家居,大部分则是生活在野外。家居最常见的蟑螂,大的有美洲蟑螂、澳洲蟑螂及短翅的斑蠊,身长约5.0cm;小的有德国蟑螂、日本姬蠊及亚洲蟑螂,体长约1.5cm,热带地区的蟑螂一般体型比较巨大。
DNA 提取是分子生物学研究中的基础步骤,其方法根据昆虫种类、样本大小、保存状态及后续实验需求的不同而有所差异。以下是几种常见的昆虫 DNA 提取方法,从原理、操作步骤、优缺点等方面进行详细介绍:
酚 - 氯仿抽提法(经典方法)
原理: 利用酚、氯仿等有机溶剂破坏细胞膜,使蛋白质变性沉淀,DNA 溶解于水相,从而实现 DNA 与蛋白质的分离。
酚 - 氯仿抽提法操作步骤
优点:提取的 DNA 纯度高,适用于各种昆虫样本,尤其适合大片段 DNA(如基因组 DNA)的提取,可用于 PCR、测序等多种下游实验。
CTAB 法(十六烷基三甲基溴化铵法)
原理CTAB 是一种阳离子去污剂,能与核酸形成复合物,在高盐溶液中(如 1.5 M NaCl)可溶,低盐溶液中(如 0.5 M NaCl)沉淀,从而分离 DNA 与其他杂质(如多糖、蛋白质)。
CTAB 法操作步骤
SDS 法(十二烷基硫酸钠法)
原理: SDS 是一种阴离子去污剂,能破坏细胞膜和核膜,使蛋白质变性,同时与蛋白质结合形成复合物;通过蛋白酶 K 消化蛋白质,再用酚 - 氯仿抽提去除蛋白质,最终沉淀 DNA。
SDS 法操作步骤
硅胶膜吸附法(商业试剂盒法)
原理: 利用硅胶膜在高盐缓冲液中吸附 DNA,而蛋白质、多糖等杂质不吸附的特性,通过洗涤缓冲液去除杂质,最后用低盐缓冲液或水洗脱 DNA。
硅胶膜吸附法操作步骤
Chelex-100 法(快速提取法)
原理: Chelex-100 是一种螯合树脂,能结合金属离子(如 Mg²⁺),抑制 DNA 酶活性,同时在高温(95-100℃)下裂解细胞,释放 DNA,通过离心去除杂质,上清液中即含粗提 DNA。
Chelex-100 法操作步骤
磁珠法(基于磁性纳米颗粒)
原理: 磁性纳米颗粒表面修饰官能团(如硅羟基),在高盐缓冲液中可与 DNA 通过氢键结合,在外加磁场作用下分离磁珠 - DNA 复合物,洗涤后用低盐缓冲液洗脱 DNA。
磁珠法操作步骤
其他方法
不同方法的选择与对比
| 方法 | 纯度 | 操作难度 | 成本 | 适用场景 |
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昆虫DNA取样有哪些注意事项?
昆虫发育阶段优先级选取,胚胎 > 新孵化的幼虫 > 早期的蛹 > 成虫;不推荐使用成虫,若仅有成虫样本,则需在成虫接近死亡时去除壳、四肢和翅膀;微小昆虫需混样时,建议送同一亲本的子代样本。
取鲜活样本置于冻存管中,液氮速冻 30min,储存在-80℃直至使用;由于昆虫体内的食物可能会造成污染,因此在液氮速冻之前进行适当饥饿处理 1-2天(体型较大昆虫可去除肠道或去除整个腹部)。
昆虫DNA样本保存有哪些注意事项?
通过选择合适的提取方法,可高效获取昆虫 DNA,为昆虫分类、种群遗传、基因表达等研究奠定基础。
昆虫的DNA提取纯度不高怎么办?
这是由于昆虫体内复杂化合物会导致提取的DNA不纯或难以获得高分子量DNA(如提取柱堵塞)。这些杂质可能是来自复眼、其他身体部位的色素、酚类化合物,刚毛和鳞片等身体部位的杂质(如大黄蜂、飞蛾,蝴蝶等)、 脂质(如幼虫)、糖类(如蜜蜂蜜囊)以及活性酶和化学物质(如甲虫的防御腺体、蜜蜂和黄蜂的毒腺、肠道或肠道微生物等)。
建议选择特定的组织(如胸部肌肉组织),去除身体上常见的污染源(如复眼、腺体、蜜囊和肠道),或在不同的生命阶段(如幼虫、蛹等)取样,有助于克服昆虫高分子量 DNA 提取的难题。
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参考文献:
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[3] Wang X, Fang X, Yang P, et al. The locustgenome provides insight into swarm formation and long-distance flight.[J].Nature Communications, 2014, 5(5):2957.
[4] Fallon T R, Lower SE, Chang C H, et al.Firefly genomes illuminate the origin and evolution of bioluminescence[J].bioRxiv, 2017: 237586.
[5] Solares E A, Chakraborty M, Miller D E, etal. Rapid low-cost assembly of the Drosophila melanogaster reference genomeusing low-coverage, long-read sequencing[J]. bioRxiv, 2018: 267401.
[6] Li S, Zhu S, Jia Q, et al. The genomic andfunctional landscapes of developmental plasticity in the American cockroach[J].Nature communications, 2018, 9(1): 1008.
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