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抗凝血酶及检测方法简介

抗凝血酶及检测方法简介 捷倍斯生物
2025-01-03
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导读:人体之所以能在出血时有效止血,又能保证血液正常流动,是因为体内存在着复杂的凝血-抗凝、纤溶-抗纤溶等机制,它们保持着动态平衡。当其中任何一个机制受到破坏时就可能导致出血或血栓性疾病。

人体之所以能在出血时有效止血,又能保证血液正常流动,是因为体内存在着复杂的凝血-抗凝、纤溶-抗纤溶等机制,它们保持着动态平衡。当其中任何一个机制受到破坏时就可能导致出血或血栓性疾病。

一.什么是抗凝血酶?

抗凝血酶(antithrombin,简称AT),也被称为抗凝血酶III(即AT-III),是人体最重要的生理性抗凝因子。
AT主要由肝脏和血管内皮细胞产生,是一种丝氨酸蛋白酶抑制剂,通过抑制凝血途径中的丝氨酸蛋白酶,如凝血酶(IIa)及活化的凝血因子VIIa、Ⅸa、Ⅹa、Ⅺa、Ⅻa等的活性而发挥抗凝作用。
凝血过程中活化的凝血因子,除了Va和VⅢa(因Va和VⅢa不属于丝氨酸蛋白酶)AT无法抑制,其余因子(见下图灰色底纹)均能不同程度的被AT抑制,特别是凝血瀑布的核心——凝血酶(下图中IIa)。因此,AT抗凝作用占到了抗凝系统总活性的70%左右,是抗凝系统的主力部队。

图源:人人文库

但是AT单独抗凝能力有限,需与肝素或血管内皮细胞上表达的硫酸乙酰肝素结合后才能发挥更大的抗凝活性。因为肝素有一个戊糖序列,能与AT高效结合,诱导AT构象改变,构象改变后的AT与凝血因子亲和力大大增加,使AT的抗凝活性提高上千倍,特别是对FIIa、FXa的抑制。

图源:广音医疗

二. 抗凝血酶异常的临床症状

正常情况下,AT活性范围为80%~120%,AT水平(含量)范围为290±30.2g/L。在特殊的生理或病理情况发生时,AT会出现异常:
AT升高,常见于血友病、再生障碍性贫血、白血病等出血性疾病以及心脏瓣膜病伴心力衰竭、口服抗凝药物期间等。AT降低,常见于肝脏疾病、血栓性疾病(VTE急性期)、弥散性血管内凝血(DIC)、妊娠期(尤其是病理妊娠)、肝素类治疗期间、先天性AT缺陷等。

三.抗凝血酶缺陷症

多种因素或疾病会导致AT活性和或水平下降,即出现抗凝血酶缺陷症。抗凝血酶缺陷症是中国人群常见的遗传性易栓症类型。

AT缺陷症会使机体抗凝功能下降,血液处于高凝状态,从而导致易栓症,进而增加静脉血栓栓塞症(VTE)、复发性流产、胎盘早剥、早产、妊娠期高血压疾病等不良妊娠结局以及不孕症等。另外一方面,由于AT是肝素的药物靶点,普通肝素/低分子肝素的抗凝效果依赖于AT活性和水平,随着AT水平下降,肝素效果下降,因此,抗凝血酶缺陷症患者使用肝素治疗可能出现无效或效果不佳的现象(即肝素抵抗)。
根据病因,抗凝血酶缺陷症可以分为遗传性和获得性两类。
遗传性AT缺陷症:AT(又名SERPINC1)基因变异
获得性AT缺陷症:AT合成减少 肠道消化吸收蛋白质功能障碍(蛋白丢失性肠炎)、肝功能障碍、口服避孕药、雌激素治疗等;AT丢失或消耗增多 肾病综合征、大面积烧伤、DIC等;
根据活性和水平变化情况,抗凝血酶缺陷症可以分为I型和II型。
Ⅰ型:抗凝血酶含量及活性均降低          

Ⅱ型:抗凝血酶活性降低(但含量正常)

四.抗凝血酶检测方法

目前临床关于AT检测包括活性检测和抗原(水平)检测,其中活性检测常用的是发色底物法,而抗原检测常用的是酶联免疫吸附法。
抗凝血酶活性检测——发色底物法
受检血浆加过量凝血酶,血浆中抗凝血酶与凝血酶形成1:1复合物,剩余的凝血酶与发色底物S-2238显色基团对硝基苯胺结合显色,显色深浅与剩余的凝血酶呈正相关,而与AT呈负相关。用比色法测定其加入发色底物试剂后吸光度的改变与校准血浆比较而测得其活性。

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抗凝血酶抗原(水平)检测——酶联免疫吸附法将抗抗凝血酶抗体包被在固相板上,标本中的抗凝血酶与固相的抗抗凝血酶抗体相结合,再加入酶标的抗抗凝血酶抗体则形成抗体-抗原-酶标抗体的复合物.加入显色基质后,根据发色的深浅多少来判断标本中的AT含量。

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