肠道微生物也就是我们所说的“肠道菌群”,其数量超过人体自身细胞的10倍以上,对营养物质代谢、人体自身发育、免疫及疾病的产生等方面都起到极其重要的作用。很多研究结果都表明肠道微生物和多种疾病发病直接相关,比如癌症、肥胖、神经变性疾病等。
采用高通量测序对样本中微生物的DNA进行测定,通过生信统计分析,进行处理,揭示肠道中微生物的种类以及相对丰度和进化关系;还可以通过实时荧光定量PCR方法,定量的研究肠道菌群,探讨微生物多样性,研究肠道微生物与环境间的相关关系;还可以通过厌氧培养,获得肠道微生物中的菌种,从菌株水平上研究肠道微生物的功能和作用。
图源:微基生物
寻找疾病组和健康组间肠道菌群的差异:分别采集健康人群和疾病人群的粪便样本,比较健康组和疾病组之间肠道菌群的差异,寻找与疾病相关的marker,这是目前最典型的研究方法;
研究药物或饮食干预群体的肠道菌群:分别采集药物或饮食干预前、后的群体的粪便样本,比较个体在不同干预阶段的肠道菌群的差异;
同一群体、不同生长发育时期的肠道菌群:如分别采集婴儿出生后0个月、4个月、12个月等时间的粪便样本,对婴幼儿的肠道菌群进行研究;
研究某一疾病发生发展进程中的群体的肠道菌群:如分别选择健康人、结直肠腺瘤患者(大部分的结直肠癌由腺瘤演变而来)、结直肠癌患者群体,研究与结直肠癌疾病进程相关的marker;
研究同一群体多个身体部位的微生物:如分别选取同一人群的粪便、唾液、牙菌斑等样本进行关联分析
人、小鼠、大鼠、猴子、鸡、羊、鱼、马、驴、熊猫、穿山甲等动物的粪便或肠道内容物;
细菌、真菌、放线菌等;
二代高通量测序、三代高通量测序、PCR-DGGE、实时荧光定量PCR、厌氧培养等;
高通量测序分析,PCR-DGGE变性梯度凝胶分析,实时荧光定量PCR(Real-time qPCR),克隆文库等检测平台。
具有厌氧培养系统,可以分离粪便样本中的微生物。
粪便采集盒、常温保存液、取样勺和保存管等。
(1)人粪便:采集新鲜的、中后段、内部的粪便样本,每个样本需1g,采好后立刻冻存于-80℃冰箱,保存期间切记反复冻融。
(2)小鼠粪便:建议采用拎尾法或者代谢笼采集新鲜粪便,每个样本需1g,采好后立刻冻存于-80℃冰箱,切记反复冻融。
(3)大鼠粪便:可采用代谢笼采集新鲜粪便样本,每个样本需1g,采好后立刻冻存于-80℃冰箱,切记反复冻融。
粪便是人或动物的大肠排遗物。粪便的四分之一是水分,其余大多是蛋白质、无机物、脂肪、未消化的食物纤维、脱了水的消化液残余、以及从肠道脱落的细胞和死掉的细菌等。一般来说,只需提取其中细菌的核酸进行研究,剩余的食物纤维、蛋白质等均会对提取造成干扰,其中食物纤维会增加裂解难度,蛋白质会降低核酸的纯度,影响下游研究的开展。
| 货号 | 产品名称 |
|---|---|
| D9015 | Stool DNA Kit 粪便DNA提取试剂盒 |
粪便样品中仅含有一小部分脱落的消化道细胞,消化脱落细胞的基因组DNA,约占总DNA的0.01%。大部分DNA为细菌DNA和食物源DNA。
目前较好的保存方法是粪便与干燥硅豆混合保存,或是在DMSO / EDTA/ Tris盐溶液中保存,可以有效减缓DNA的降解。
粪便样品中大部分的DNA来自于细菌和食物。粪便中细菌的含量较大,因此,粪便DNA的含量差别非常大,一般为200 ng-20 μg不等。
粪便样品中含有多种微生物,其多聚糖、植物多糖、胆酸、 胆盐、胆色素、消化液、粘液等均会对Taq酶等的活性产生影响,而影响到粪便DNA的下游检测。
由于粪便会不同程度地暴露在环境中,因而易于受到外源遗传物质的污染,在粪便DNA的提取以及PCR扩增过程中,污染已经成为影响研究结果的重要因素。因而在DNA提取及PCR扩增过程中,所有步骤进行空白对照实验是必要的,另外,在粪便样品收集、保存以及提取过程中,采用严格的消毒措施也可以有效减少污染的机会。
由于粪便样品中含有大量的PCR等抑制因子,如果纯化过程没有将其去除掉,会影响到特异性片段的扩增。但是模板添加量也是个关键性问题,虽说PCR检测对其模板是非常灵敏的,但也是有其正常的检测域,一般要在100 ng以上,而粪便样品含有的核DNA非常少,在纯化过程中产量不高的话,会由于模板添加量在其正常检测域之外而导致无法扩增出特异性片段。
品牌优势
捷倍斯生物可以提供专业和完善的核酸分离纯化解决方案,有硅胶柱法、磁珠法与溶液直接法的核酸纯化产品,在二代测序的样品前处理方面有着专业的技术与积累,有完善的针对唾液、血液与血浆等样品的保存、运输与高通量核酸纯化等整套的解决方案。 在诊断试剂原料方面,捷倍斯生物可以提供生物染色剂、高端的表面活性剂、显色底物、生物缓冲剂以及酶制剂与其稳定剂等系列产品。
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