蛋白酶K，是一种切割活性较广的丝氨酸蛋白酶。蛋白酶K的应用比较广泛。包括制备脉冲电泳的染色体 DNA，蛋白质印迹以及去除DNA和RNA制备中的核酸酶。蛋白酶K的一般工作浓度是50—100μg/ml。在较广的pH范围内(pH 4-12.5)均有活性。
蛋白酶K的主要作用：蛋白酶K在原位杂交技术中通常用于杂交前的处理，它具有消化包围靶DNA蛋白质的作用，以增加探针与靶核酸结合的机会，提高杂交信号.但蛋白酶K的浓度过高、消化时间过长或孵育温度过高时，都会对细胞的结构有一定的破坏，导致组织切片的脱落，细胞核 的消失，从而影响杂交结果。EDTA缓冲液可以替代蛋白酶K的作用，解决上述出现的问题，并能达到理想的染色效果。
图 1 蛋白酶K和P（DLL-co-BLG）联合作用清除MRSA生物被膜和持留菌的示意图
Figure 1. Schematic diagram of combined action of protease K and P（DLL-co-BLG） to eradicate MRSA biofilms and persister cells
一、蛋白酶K有哪些作用？
蛋白酶K是一种在宽pH范围和高温下都保持高活性的丝氨酸蛋白酶。其核心价值在于 “清除” 实验中会干扰下游应用的蛋白质，主要作用于：
降解各种蛋白质：高效分解组蛋白、核基质蛋白、酶类及其他细胞结构蛋白。
灭活核酸酶：彻底降解DNase和RNase，这是获得完整、高质量核酸的关键前提。
灭活其他干扰酶：降解样品中可能存在的其他酶类，如磷酸酶、聚合酶等，防止其干扰后续反应。
二、蛋白酶K主要有哪些应用场景？
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| 核酸提取（DNA/RNA） | 核心应用
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| 去除酶/核酸污染 |
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| 病理学检测 |
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| 降解朊病毒 |
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三、蛋白酶K标准使用方法与步骤
工作液配制
储存液：通常为 10-20 mg/mL 的溶液，溶于无菌水或特定缓冲液中，-20°C保存。
工作浓度：根据样本类型和体积，常用终浓度为 50-200 μg/mL。
缓冲体系：通常在含有 SDS 和 EDTA 的缓冲液中使用，以维持其高活性。
捷倍斯生物生产的Proteinase K 蛋白酶K(GBCBIO-P3440) 单位活性高，使用量更少，批次均通过DNase/RNase活性检测，-20°C保存下，长期保持活性稳定，性能可靠。
典型操作步骤（以组织DNA提取为例）
裂解：将组织样本置于含SDS和EDTA的裂解液中。
消化：加入蛋白酶K至终浓度100 μg/mL，55°C 孵育 2小时至过夜。
灭活：完成后，95°C 加热 10-15分钟 以灭活蛋白酶K，防止其降解后续实验中的酶。
关键优化参数
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| 工作温度 | 37°C - 65°C 均可有效工作，提高温度可显著增强消化效率。 |
| pH范围 |
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| 孵育时间 |
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| 失活条件 | 95°C 加热10-15分钟是标准灭活方法。 |
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-20℃冰箱，避免反复冻融，有效保证12月。 |
四、蛋白酶K注意事项
自我降解：在含有SDS的缓冲液中长时间孵育，蛋白酶K会发生自我降解，这是正常现象。
抑制剂：苯甲基磺酰氟（PMSF）等丝氨酸蛋白酶抑制剂可强烈抑制其活性，需避免接触。
纯度要求：用于RNA提取时，必须使用无RNase的蛋白酶K。
储存：-20°C 冷冻保存，避免反复冻融，建议分装。
蛋白酶K凭借其广谱、高效、稳定的特性，成为了分子生物学实验的基石。它的核心使命可以概括为：通过降解蛋白质屏障，释放出纯净的核酸；通过彻底灭活核酸酶，保护目标分子不受降解；为检测“增敏”：通过暴露隐藏的靶点，提升检测技术的灵敏度。
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捷倍斯生物可以提供专业和完善的核酸分离纯化解决方案，有硅胶柱法、磁珠法与溶液直接法的核酸纯化产品，在二代测序的样品前处理方面有着专业的技术与积累，有完善的针对唾液、血液与血浆等样品的保存、运输与高通量核酸纯化等整套的解决方案。 在诊断试剂原料方面，捷倍斯生物可以提供生物染色剂、高端的表面活性剂、显色底物、生物缓冲剂以及酶制剂与其稳定剂等系列产品。
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