进行分子诊断的标本,在采集后,其核酸(DNA,RNA)的稳定性与采集的容器、标本类别、环境温度、运输条件和储存状态等密切相关,核酸的稳定性是影响分子诊断检测结果的重要因素。因此,对标本的稳定性的质量控制是分析前质量管理的必要因素之一。
比如说外周血是最常用的分子诊断原始样本,包含全血、血清、血浆、淋巴细胞层等多种血液成分,如果用于RNA检测，就必须要考虑到RNA的降解,大多数条件下推荐直接添加RNA稳定剂，而用于DNA分析的全血样本稳定性的考量就相对弱一些。
一、DNA/RNA提取样本类型有哪些？
分子实验中主要的样本类型有：纯核酸类、组织类、细胞类及环境类。不同样本具有不同的保存方式以及操作注意事项。
常见的实验样本类型
二、不同样本运输保存有什么区别？
类型 |
检测目标 |
稳定性及保存注意事项 |
组织 |
DNA/RNA |
新鲜组织应尽快加入到含有核酸保护剂的管中，放置于冰上运输至实验室；石蜡包埋组织中的核酸在室温即可保持稳定。 |
血液 |
全血的DNA/RNA |
DNA：全血室温可稳定保存24h，2-8℃稳定保存72h，-20℃可长期保存 RNA：室温不建议保存，样本应置于含有核酸稳定剂的管中，放置于冰上运输至实验室。 |
血清/血浆的cfDNA/ctDNA/病毒DNA/病毒RNA |
cfDNA：2-8℃，8h内分离血浆，-20℃或更低温度稳定保存； ctDNA：抽血后4-5h内即需要完成核酸提取； 病毒DNA：2-8℃稳定一周，-20℃稳定一年以上； 病毒RNA：2-8℃，6h内分离血浆，-20℃或更低温度保存 |
|
干血片的DNA |
室温稳定保存19个月，需要注意防潮。 |
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细胞 |
DNA/RNA |
37℃保持细胞活力即可。 |
骨髓 |
RNA |
必须在采集后立即置于RNA稳定剂中，或者于液氮中速冻 |
尿液 |
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低温保存(2-8C)，尤其在25℃或者更高温度下，尿液的 低PH和高索会迅速使 DNA 变性 |
脑脊液 |
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DNA病毒:-20℃或者·70℃保存 RNA病毒：采集后标本后1-4h提取RNA，否则应立即去掉标本中的红细胞，然后低温保存 |
胸水、脑水、脑脊液等其他生物体液样本 |
DNA |
低温(2-8℃)保存，尽快提取检测。 |
不同类型样本核酸保存方法及稳定性
三、不同样本前处理步骤及注意事项
3.1、组织样本：
块状组织样本短时间内无法充分裂解，一般需要进行样本预处理。组织取材在组织离体30min内完成，取样的动作要尽量快速利索，将组织按任一方向切成黄豆粒大小。
组织DNA提取：新鲜组织样本用生理盐水清洗2次，即刻进行实验。如若不立即进行实验，可用液氮速冻，-80℃冻存。
组织RNA提取：将动物或植物组织切成小块，在液氮中磨碎或用匀浆器匀浆处理,快速转入装有1mL TRNzol的2mL离心管中，立即进行实验。若后期再进行实验，尽量保存时将样本浸入RNA样品保存液(R1105)后置4℃冰箱过夜（4℃过夜是必需的，这样可使RNA样品保存液完全渗入到组织中），然后转移到-20℃冰箱。或者液氮研磨组织，加入TRNzol，放入-80℃保存。
组织样本RNA提取流程图
3.2、细胞样本：
DNA提取：细胞收集沉淀后，进行液氮速冻，-80℃保存。
RNA提取：
1）贴壁细胞：吸尽培养液，每10cm2培养面积加入1mL TRNsol，用加样器吹打数次，以确保细胞完全裂解，然后转移至离心管中。注：贴壁细胞TRNsol的使用量应由培养皿表面积决定，而非由细胞数目决定。TRNsol量不足可能导致提取的RNA中有DNA污染；
2）悬浮细胞：离心收集细胞，吸尽液体，每5-10×106动植物或酵母细胞，或每1×107细菌细胞加入1mL TRNsol，用加样器吹打，使其完全裂解，然后转移至离心管中。 注：添加TRNsol前切勿洗涤细胞，以免RNA降解。必要时可以用匀浆器来裂解某些细菌或者酵母细胞。若后期再进行RNA提取实验，细胞用液氮速冻，-80℃冻存。
3.3、血液样本：
采用含有抗凝剂的真空采血管保存即可。但采血管中的抗凝剂种类多样，抗凝剂的种类也会直接影响后续检测结果，面对这么多的采血管如何进行选择？我们建议使用EDTA或枸橼酸钠抗凝管，不建议使用肝素抗凝管（因肝素在后面的核酸提取过程中很难去除，且肝素对PCR反应有很强的抑制作用，因此不建议使用肝素抗凝管）。采集完血液，颠倒混匀备用。另外冰冻血液溶解过程中会有破碎的细胞释放RNA酶，因此在冰冻前加入TRNsol，切勿直接冻存新鲜血液，保存好的血液应避免反复冻融。
3.4、血清/血浆样本：
全血不加抗凝剂分离的上清是血清，加入抗凝剂分离的上清是血浆。取全血后，静止1-2h，置于离心机3000rpm离心15min即可获得血清或血浆。
四、样本前处理利器—RNA样品保存液
GBCBIO® RNAlocker 保存液（货号：R9101），随时随地取样；放进保存液，即可保存运输，无需液氮，干冰；保存的样本可反复冻融，RNA的提取完整性和数量不受影响，可以保证RNA和蛋白不降解! 可广泛应用于多种脊椎动物样本,包括脑、心、肾、脾、肝、肺和胸腺等动植物组织，以及细胞、细菌、血液中等有核细胞的保存。RNAlocker 一种水相的，无毒的组织保存液体，可以迅速渗入新鲜组织细胞的胞浆中，在非冻状态下原位稳定和保护细胞内的RNA。
稳定性高：贮存于RNAlocker中的样品组织4℃可至少保存1个月、室温1周和37℃ 1天。对于-20℃或-80℃ 长期保存，先将样本在4℃条件下过夜渗透，然后将组织从RNAlocker中取出后放入-20℃或-80℃ 长期保存。可实现样品长距离的邮递和运输，更便宜，简单, 有利学术合作和交流。
RNAlocker：http://www.gbcbio.cn/Product/R9101.html
捷倍斯生物 GBCBIO 提供专业和完善的核酸分离纯化解决方案，有硅胶柱法、磁珠法与溶液直接法的核酸纯化产品，在二代测序的样品前处理方面有着专业的技术与积累，针对唾液、血液与血浆等样品的核酸纯化等整套的解决方案。
柱式法
货号 |
产品名称 |
推荐样本 |
应用领域 |
| D1105 | 血液DNA提取试剂盒 Blood DNA Kit |
新鲜血液制备黄层、血清、淋巴液、口腔或其它体液DNA | 疾病早筛、疾病预后检测 |
| D1115
|
血凝块DNA提取试剂盒 Blood Clot DNA Kit |
无需研磨，直接裂解消化，30分钟内完成多个样品的DNA提取 |
疾病早筛、法医鉴定 |
| D1201 | 血液DNA提取试剂盒(溶液型 I）Relax-ISO Blood DNA Kit I | 加入各种抗凝剂的新鲜或冻存血液样本 | 疾病早筛、疾病预后检测 |
| D1301 | 血液DNA大量提取试剂盒 Blood DNA Maxi Kit |
一次性处理3-10ml 加入各种抗凝剂的新鲜或冻存血液样本 | 疾病早筛、疾病预后检测 |
| D1401
|
血液DNA提取试剂盒(溶液型 II）Relax-ISO Blood DNA Kit II | 加入各种抗凝剂的新鲜或冻存血液样本 | 疾病早筛、疾病预后检测 |
D1705 |
石蜡包埋组织DNA提取试剂盒 FFPE DNA Kit |
石蜡包埋组织切片（FFPE） |
肿瘤检测、药物基因组筛查 |
D2105 |
组织/细胞DNA提取试剂盒 Cell/Tissue DNA Kit |
动物组织 | 动物的基因组研究、基因变异研究 |
| D2205
|
无细胞游离DNA提取试剂盒Circulating free DNA Kit | 血浆、全血、无细胞体液、病毒原液和感染病毒的组织中提取游离DNA |
疾病早筛、疾病预后检测 |
磁珠法
货号 |
产品名称 |
推荐指南 |
应用领域 |
M2105 |
磁珠法无细胞游离DNA提取试剂盒 MagIso Circulating DNA Isolation Kit |
从血清、血浆中提取游离核酸 |
疾病早筛、疾病预后检测 |
M3115 |
快速磁珠法血液DNA提取试剂盒 Fast MagIso Blood DNA Isolation Kit |
从全血中提取核酸 | 临床检测、动物育种 |
M7105 |
磁珠法动物组织/细胞DNA提取试剂盒 MagIso Tissue/Cell DNA Isolation Kit |
从动物组织中提取核酸 |
动物基因组研究、基因变异研究 |
植物样本DNA提取
样本类型兼容植物根、茎、叶、花、果实、种子、菇类（茶叶 枇杷 马铃薯 西红柿 水稻种子 玉米 枸杞 薯片 三叶草 葡萄 芒果 烟叶等）
柱式法
货号 |
产品名称 |
推荐指南 |
应用领域 |
D4105 |
植物DNA提取试剂盒 Plant DNA Kit |
新鲜或干燥植物组织样品 |
植物基因组研究、植物基因变异研究、植物育种、植物生长发育研究等 |
D5105 |
Hpure植物DNA提取试剂盒 Hpure Plant DNA Kit | 有效除去多糖多酚 从多种植物的不同样品中提取DNA |
磁珠法
货号 |
产品名称 |
推荐指南 |
应用领域 |
M8105 |
磁珠法植物DNA提取试剂盒 MagIso Plant DNA Isolation Kit |
各种植物，包括富含多糖多酚的植物样品中提取DNA |
植物基因组研究、植物基因变异研究、植物育种、植物生长发育研究等 |
| M8115 | 磁珠法快速植物DNA提取试剂盒 Fast MagIso Plant DNA Isolation Kit |
各种植物，包括富含多糖多酚的植物样品中提取DNA |
微生物样本DNA提取
样本类型包含培养上清、分泌物、拭子、粪便、土壤、牛奶、尿液、培养细菌等
柱式法
货号 |
产品名称 |
推荐指南 |
应用领域 |
| D1805 | 昆虫DNA提取试剂盒 Insect DNA Kit |
从昆虫、软体动物、节肢动物、蛔虫等样品中提取DNA |
物种检测、害虫防治 生态防止 |
D1905 |
拭子DNA提取试剂盒 Swab DNA Kit |
一次性地处理单个拭子 |
新生儿筛查、法医检测等 |
D2305 |
唾液DNA提取试剂盒 SalivaDNA Isolation Kit |
从唾液/尿液等液体样品中快速大量纯化高纯度的基因组DNA |
新生儿筛查、法医检测物种检测等 |
D2405 |
饲料DNA提取试剂盒 Feedstuff DNA Kit |
从饲料中提取DNA |
动物源安全检测 饲料食品安全检测 |
| D2505 | 食品DNA提取试剂盒 Food DNA Extraction Kit |
深加工食品中提取DNA | |
| D2605 | 真菌DNA提取试剂盒 Fungal DNA Kit |
从新鲜或干燥真菌提取DNA |
细菌、真菌研究 |
| D2705 | 环境水样DNA提取试剂盒 Water DNA Kit |
从各种来源的水体样品中快速提取DNA |
水体微生物检测，种群结构检测 |
| D2805 | 食品DNA提取试剂盒 Hpure Food DNA Kit |
有效除去多糖多酚等，从各种食品中提取高质量的DNA |
动物源安全检测 饲料食品安全检测 |
| D3105
|
细菌DNA提取试剂盒 Bacterial DNA Kit |
从大量不同种类的细菌中提取高质量的总DNA |
细菌、真菌研究 |
| D6105 | 酵母DNA提取试剂盒 Yeast DNA Kit |
培养酵母中提取高质量的DNA | |
| D7105 | Hpure真菌DNA提取试剂盒 Hpure Fungal DNA Kit |
有效除去多糖多酚等，能够从多种真菌的不同样品中提取DNA |
|
| D8105
|
环境土壤DNA提取试剂盒 Soil DNA Kit |
有效去除腐殖酸 一次可同时处理多个土壤样品 |
土壤研究、环境研究 |
| D9105
|
粪便DNA提取试剂盒 Stool DNA Kit |
提取病原菌等微生物、未消化食物粪便的DNA |
粪便研究、肠道微生物研究 |
磁珠法
货号 |
产品名称 |
推荐指南 |
应用领域 |
M1105 |
磁珠法唾液DNA提取试剂盒 MagIso Saliva DNA Isolation Kit |
从唾液中提取核酸 |
新生儿筛查、法医检测等 |
M2215 |
磁珠法细菌DNA提取试剂盒 MagIso Baterial DNA Isolation Kit |
从大量不同种类的细菌中提取高质量的总DNA |
细菌、真菌研究 |
M3115 |
快速磁珠法血液DNA提取试剂盒 Fast MagIso Blood DNA Isolation Kit |
全血中提取核酸 |
临床检测、动物育种 |
| M4105 |
磁珠法环境样品DNA提取试剂盒 MagIso Environmental Samples DNA Kit |
从水、土壤与粪便样品中提取核酸 |
土壤研究、环境研究 |
| M6105 | 磁珠法病毒DNA/RNA提取试剂盒 MagIso Virus DNA/RNA Isolation Kit |
从血浆、无细胞体液、病毒原液和感染病毒的组织中提取各种病毒RNA/DNA |
病毒鉴定、动物疫病检测、流感病毒检测 |
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品牌优势
捷倍斯生物可以提供专业和完善的核酸分离纯化解决方案，有硅胶柱法、磁珠法与溶液直接法的核酸纯化产品，在二代测序的样品前处理方面有着专业的技术与积累，有完善的针对唾液、血液与血浆等样品的保存、运输与高通量核酸纯化等整套的解决方案。 在诊断试剂原料方面，捷倍斯生物可以提供生物染色剂、高端的表面活性剂、显色底物、生物缓冲剂以及酶制剂与其稳定剂等系列产品。
做值交往的人｜做值得信赖的产品
